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教育克隆载体表达载体 |
分类: 疑难问题的解决 |
一、克隆载体
用于在受体细胞中进行目的基因扩增的载体。
作为基因克隆载体至少必须具备3个条件:
1、具有能使外源DNA片段组入的克隆位点。
2、能携带外源DNA进入受体细胞,或游离在细胞质中进行自我复制,或整合到染色体DNA上随染色体DNA的复制而复制。
3、必须具有选择标记,承载外源DNA的载体进入受体细胞后,以便筛选克隆子。
目前已构建应用的基因克隆载体有质粒载体、噬菌体载体、病毒载体、以及由它们互相组合或者与其他基因组DNA组合而成的载体。但是这种载体可能只有复制起始位点而不具备与表达相关的启动子。
分子克隆中最常用的是大肠杆菌,但有时也会用其他微生物作为宿主细胞,所以在构建载体时可以在上面构建第二个复制起始位点,使他在另一个宿主细胞中也能进行复制,这种载体成为穿梭载体。
二、表达载体
表达载体是适合在受体细胞中表达外源基因的载体,包括原核表达载体和真核表达载体。
原核表达载体的要求:
1、有一个强的原核启动子及其两端的调控序列。
2、外源基因上游应有SD序列,而SD序列与起始密码子ATG之间有合适的距离。
3、外源基因插入后有正常的阅读框架。
4、外源基因下游有不依赖与p因子的转录终止子。
真核表达系统有酵母表达系统,哺乳细胞表达系统,昆虫细胞表达系统。真核表达载体大多是穿梭载体,有两套复制原点和筛选标记,一套在大肠杆菌中使用,一套在真核细胞中使用。
附:教材的示意图显示出两种载体?