疑难问题：学生经常会问到这样的问题，什么是植物细胞悬浮培养？为什么要进行植物细胞悬浮培养？

试题：下列属于植物克隆和动物克隆共有的培养方法是________。

A．悬浮培养、器官培养　　　       B．贴壁培养、传代培养

C．器官培养、愈伤组织培养          D．原生质体培养、传代培养

答案：A

解析：贴壁生长是动物细胞培养时的特性；愈伤组织是指植物细胞在组织培养过程中形成的一种排列疏松而无规则的无定形状态、高度液泡化的薄壁细胞，动物细胞无愈伤组织培养；原生质体的培养应该应用于植物，因为去除细胞壁的植物细胞称为原生质体（有的解析认为传代培养应用于动物细胞培养过程中，我认为是误解，因为植物组织培养也有传代培养，即所谓的继代培养）。

一、什么是植物细胞悬浮培养？

植物细胞悬浮培养指将游离的单细胞或细胞团按照一定的细胞密度悬浮在液体培养基中，用摇床或转床进行培养的方法。

植物离体培养可产生愈伤组织。将疏松型的愈伤组织悬浮在液体培养基中并在振荡条件下培养一段时间后，可形成分散悬浮培养物。

二、为什么要对植物细胞悬浮培养？

利用固体琼脂培养基对植物的离体组织进行培养的方法在植物遗传实验中已经得到广泛的应用。但这种方法在某些方面还存在一些缺点，比如在培养过程中，植物的愈伤组织在生长过程中的营养成分、植物组织产生的代谢物质呈现一个梯度分布，而且琼脂本身也有一些不明的物质成分可能对培养物产生影响，从而导致植物组织生长发育过程中代谢的改变而利用液体培养基则可以克服这一缺点，当植物的组织在液体培养基中生长时，我们可以通过薄层震荡培养或向培养基中通气用以改善培养基中氧气的供应。

目前这项技术已经广泛应用于细胞的形态、生理、遗传、凋亡等研究工作，特别是为基因工程在植物细胞水平上的操作提供了理想的材料和途径。经过转化的植物细胞再经过诱导分化形成植株，即可获得携带有目标基因的个体。

三、植物细胞悬浮培养注意点

一般的操作过程是把未分化的愈伤组织转移到液体培养基中进行培养。在培养过程中不断进行旋转震荡，一般可用100～120r/是min的速度进行。由于液体培养基的旋转和震荡，使得愈伤组织上分裂的细胞不断游离下来。在液体培养基中的培养物是混杂的，既有游离的单个细胞，也有较大的细胞团块，还有接种物的死细胞残渣。

在液体悬浮培养过程中应注意及时进行细胞继代培养，因为当培养物生长到一定时期将进入分裂的静止期。对于多数悬浮培养物来说，细胞在培养到第18～25d时达到最大的密度，此时应进行第一次继代培养，即及时用无菌的吸管吸取部分培养物到一新的培养基中继续培养，应同时还要及时淘汰一些大的组织团块和黄褐色的坏死组织。

在继代培养时，应将较大的细胞团块和接种物残渣除去。若从植物器官或组织开始建立细胞悬浮培养体系，就包括愈伤组织的诱导、继代培养、单细胞分离和悬浮培养。