教材研究：必修1教材中的活动《观察各种各样的细胞》中，有蛙血涂片的观察实验，需要制作蛙的血涂片（或人血涂片）。记得刚刚参加工作时，教学生《生理卫生》，就有制作血涂片，科技活动也做过血型的鉴定。那么，如何制作血涂片呢？

一、实验原理

将一小滴血液均匀涂在玻片上，呈单层分布，制成薄血片。

用瑞氏染液进行染色。细胞中的碱性物质，如RBC中的血红蛋白及嗜酸性粒细胞嗜酸性颗粒等与酸性染料伊红结合染成红色；细胞中的酸性物质，如淋巴细胞胞质及嗜碱性粒细胞质中的嗜碱性颗粒等与碱性染料亚甲蓝结合染成蓝色；中性粒细胞的中性颗粒呈等电状态与伊红和亚甲蓝均可结合，染成淡紫红色。

二、操作过程

血涂片制备可分5个步骤进行：消毒→取血→推片→染色→观察。

1、采血   

静脉采血后，使用玻璃棒、毛细管、注射针头等在距载玻片一端1cm处加1滴抗凝血。 

2、推片  

左手平执载玻片，或放在类似桌子等平坦地方，右手持推片从前方接近血滴，使血液沿推片边缘展开成适当的宽度，立即将推片与载玻片呈 30－45°角，轻压推片边缘将血液推制成厚薄适宜的血涂片，血涂片应呈舌状，头、体、尾清晰可见。 

3、干燥

将推好的血涂片在空气中晃动，使其迅速干燥。天气寒冷或潮湿时，应于37温箱中保温促干，以免细胞变形缩小。 

4、标记

在载玻片的一端用记号笔编号。 

5、染色

用特种玻璃铅笔在血膜两侧画两条线，防止染液外溢。再将瑞氏染液滴在血膜上，至染液淹没全部血膜，染1分钟。加等量蒸馏水(或缓冲液)与染液混合再染5分钟。最后用蒸馏水把染液冲掉，用吸水纸吸干，自然干燥后，即可观察。

6、用显微镜观察

三、血涂片染色

1、瑞氏染料法

瑞氏染料是由碱性染料美蓝和酸性染料黄色伊红合称伊红美蓝染料即瑞氏 （美蓝－伊红Y）染料。

伊红钠盐的有色部分为阴离子，无色部分为阳离子，其有色部分为酸性，故称伊红为酸性染料。美蓝通常为氯盐是碱性的，美蓝的中间产物结晶为三氯化镁复盐，其有色部分为阳离子，无色部分为阴离子，恰与伊红钠盐相反。

瑞氏-吉姆萨混合染色能集合瑞氏染色与吉姆萨染色的优点。 

2、染色方法

标记血涂片，将血涂片平放在染色架上，滴加A液覆盖整个血膜，30秒－1分钟后，滴加B液，将A、B液混匀，可用洗耳球轻吹液面，A、B液的比例为1:2，静置水平位置染色5－10分钟后，将载玻片拿起，轻轻晃动，使染料不再附着于血膜上。把水流调至最小，平持载玻片，与水流方向呈90度，在血膜头部冲入，向血膜的尾端调整玻片的角度，直至染料冲干净，冲洗干净后的血涂片，放置在血片架上将水自然控干，或倾斜玻片等待自然干燥。

3、判断染色结果

在正常情况下，良好的染色结果为血膜外观为淡紫红色；低倍镜下，细胞分布均匀；细胞呈粉红色，少见染色颗粒，白细胞胞质能显示各类细胞的特有色彩，白细胞核染成紫红色。

另外，载玻片也有一定的要求：制备血涂片使用的载玻片要有很好的清洁度。新的载玻片常有游离碱质，应用清洗液或10% 盐酸浸泡24小时，然后再彻底清洗。用过的载玻片可放入适量肥皂水或洗涤剂的水中煮沸20分钟，再用热水将肥皂和血膜洗去，用自来水反复冲洗，然后擦干备用。