疑难问题：胚胎分割的方法有哪些？

1、毛细管吹吸法

4～8-细胞期胚胎：

半胚分割固定后的胚胎，用微细玻璃针切开透明带。自切口处伸入微吸管，吸住半数卵裂球，慢慢取出，即可把胚胎等分成两份。

4～8-细胞期胚胎也可进行四分胚切割。

单个卵裂球的分离： 

将2～8－细胞期胚胎，用显微操作或酶液处理去掉透明带后，移入不含有Ca^2＋、Mg^2＋的mPBS液中，用微吸管反复轻轻吹打即成。

把分割的半胚或单个卵裂球装入事先准备好的未受精或退化胚胎的透明带内培养，发育至桑椹期或早期囊胚时供胚胎移植使用。

2、显微手术法

桑椹/囊胚的分割： 

首先将胚胎在室温下用0.2%～0.3%的蛋白酶液（PBS液稀释）处理30秒种，使透明带软化，便于操作。软化后的胚胎固定后，切开透明带可将桑椹胚2～4等分分割，之后还原于完整的透明带中培养，发育到一定程度时供胚胎移植使用。上述分割后的胚胎也可不还原于透明带，经裸胚培养后进行移植。部分分割后的胚胎可供性别鉴定或冷冻保存使用。

3、徒手分割法：

先用0.1%－0.2%链霉蛋白酶软化透明带，在实体显微镜下，用自制切割针直接等分切割胚胎，为防止切割时胚胎滚动，可将胚胎置于微滴中进行分割，分开后及时加入液体。

无论哪种方法，分割好的半胚应完全分离，可分别装入空透明带内，也可不装入透明带移植。分割桑椹胚无方向性，而囊胚则必须沿着等分内细胞团的方向分割胚胎。

此外，分割成的半胚在冷冻解冻后经移植，仍可以发育成新个体，并可用来生产异龄同卵双生后代，在育种方面发挥作用。