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有关限制性核酸内切酶的若干问题

(2017-09-13 22:36:59)
标签:

教育

限制性核酸内切酶

分类: 疑难问题的解决

有关限制性核酸内切酶的若干问题

学生的问题:教材中说,限制性核酸内切酶一般是从微生物中获取,它对微生物有什么作用?它为什么不切割自己的DNA分子 ?限制性核酸内切酶的种类在做试题时碰到有多种,能不能总结一下?

关于限制性核酸内切酶以前也研究过:

链接:限制性核酸内切酶识别序列的结构情况

一、限制性核酸内切酶的类型

根据限制酶的结构,辅因子的需求切位与作用方式,可将限制酶分为三种类型,分别是第一型(Type I)、第二型(Type )及第三型(Type )。

第一型限制酶:

同时具有修饰及识别切割的作用;另有识别DNA上特定碱基序列的能力,通常其切割位距离识别位可达数千个碱基之远。例如:EcoBEcoK

第二型限制酶(教材中提到的那种):

类中的限制性内切酶在分子克隆中得到了广泛应用,它们是重组DNA的基础。

只具有识别切割的作用,修饰作用由其他酶进行。所识别的位置多为短的回文序列;所剪切的碱基序列通常即为所识别的序列。是遗传工程上,实用性较高的限制酶种类。例如:EcoRIHind

例如,EcoR识别六个核苷酸序列:5'- G↓AATTC-3'

类酶切割位点在识别序列中,有的在对称轴处切割,产生平末端的DNA片段(如Sma5'-CCC↓GGG-3');有的切割位点在对称轴一侧,产生带有单链突出末端的DNA片段称粘性末端,如EcoR切割识别序列后产生两个互补的粘性末端。

第三型限制酶:

与第一型限制酶类似,同时具有修饰及识别切割的作用。可识别短的不对称序列,切割位与识别序列约距24-26个碱基对。例如:Hinf

二、限制性核酸内切酶的作用

限制性核酸内切酶的作用实际就是限制酶降解外源DNA,维护宿主遗传稳定的保护机制。

自身的DNA没有被分解的原因:通过自身的DNA甲基化,甲基化是常见的修饰作用,可使腺嘌呤A和胞嘧啶C甲基化而受到保护,即让它们在甲基转移酶的作用下,与甲基发生共价结合。

通过甲基化作用达到识别自身遗传物质和外来遗传物质的目的。

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