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DNA复制方式的研究简史

(2017-01-14 00:00:24)
标签:

教育

半保留复制

分类: 疑难问题的解决

DNA复制方式的研究简史

学生的问题:DNA的复制是半保留还是全保留复制的实验证据可以理解,那么如何理解混合型复制(又称弥散型复制)?因为混合型的复制一次复制后也应该是中间型情况其实,第二代看不出,可以通过第三代,第三代中还是可以区分出来是半保留复制还是混合型复制,甚至加热解为单链再进行密度梯度离心再观察。据教材,还可以通过5-溴尿嘧啶(Brdu)进行染色观察区分

1953年沃森(James  Watson)和克里克(Francis  Crick)提出了著名的DNA双螺旋以及双链间碱基配对的模型,根据这个模型,他们进一步提出了DNA复制的半保留模型,虽然这个模型比当时并存的全保留模型看起来简单易行的多,但始终缺乏有说服力的数据。

最后在1958年,当时在Caltech作研究生的Meselson和作博士后的Stahl设计并实现了这组著名的,证明了DNA复制半保留机理的实验。

当时的复制有三种假说,即半保留复制、全保留复制、和混合型复制,都以原来亲本DNA双链分子作为模板链。一种方法称为全保留复制,在复制过程中新的DNA分子单链结合在一起,形成一条新的DNA双链,而亲本DNA双链仍然被保留在一起。另一种方法称为混合型复制,在复制过程中亲本DNA双链被切割成小片段,分散在新合成的两条DNA双链分子中。

1958年,Meselson和Stahl进行了实验,证明了DNA分子是以半保留方式进行自我复制。

首先,让大肠杆菌在以15NH4Cl为唯一氮源的培养基中连续培养15代,使所有的DNA分子都被标记上15N。15N-DNA的密度比普通14N-DNA的大,在氯化铯密度梯度离心时,这两种DNA形成位置不同的区带。如果将有15N标记的大肠杆菌转移到普通的培养基(含14N的氮源)中培养,经过一代之后,所有DNA的密度都介于15N-DNA和14N-DNA之间,即形成15N-14N杂合分子。两代后,14N分子和15N-14N杂合分子等量出现。若再继续培养,可以看到14N-DNA增多。

当把15N-14N杂合分子加热变性时,它们只形成含15N的重链DNA,与只含14N的轻链DNA(即单链无15N-14N杂合)。这样也就排除了散布式复制。

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