原生质体活力的测定

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浙科版P24对原生质体培养进行了一定的阐述, 包括原生质体的获得方法,原生质体培养后的一些应用,开拓了植物细胞工程的应用范围。
事实上,原生质体培养前需要对其活力进行检测,很多学生认为可以用质壁分离的方法,说明对原生质体不了解。
原生质体(protoplast)是去除细胞壁,由质膜包裹的裸露细胞。由于原生质体失去了细胞壁这一屏障,因而使其具有特殊的优点,可作为一个单细胞系统用于细胞壁再生、膜的透性及离子转运、细胞分裂与分化、细胞器摄入、病毒侵染机理等基础理论的研究。
纯化的原生质体需经活力测定后方可用于培养。活力测定的方法有:
1、根据形态待征判断其活力:原生质体呈绿色(若来源于叶片)及圆而鼓者为活原生质体。
2、荧光染料活体染色法:荧光素染料可自由透过细胞膜,在细胞内被酯酶水解为荧光素,后者不能自由透过细胞膜而滞留于细胞内,在荧光显微镜下根据荧光强度即可判断原生质体死活。
3、酚藏花红染色法:活原生质体能吸收呈红色,无活性的则不能吸收而无色。
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