人结肠癌细胞荧光素酶标记的检测与应用及注意事项！

人结肠癌细胞荧光素酶标记是将荧光素酶（Luciferase）基因通过基因转染技术导入细胞，使其稳定表达。当加入特定底物时，细胞会产生可检测的生物发光，广泛用于活体成像、药物筛选等研究。

核心标记方法（慢病毒介导法）

这是目前主流且成功率最高的方法，适用于构建稳定表达的细胞系。

载体构建：选择含荧光素酶基因（常用萤火虫荧光素酶 FLuc）和抗性筛选基因的慢病毒载体。

病毒包装：将载体与辅助质粒共转染到包装细胞中，收集并浓缩病毒液。

细胞感染：将病毒液加入处于对数生长期的人结肠癌细胞培养液中，孵育感染。

筛选与验证：用对应抗生素筛选阳性细胞克隆。通过检测发光强度，挑选高活性、稳定表达的单克隆细胞株。

扩大培养：对验证合格的细胞进行扩大培养和冻存，用于后续实验。

关键检测与应用

活性检测：向细胞中加入 D - 荧光素底物，使用酶标仪或活体成像系统检测发光信号，其强度与细胞数量或活力正相关。

主要应用：活体成像（追踪肿瘤生长、转移）、药物筛选（评估药物对肿瘤细胞的杀伤效果）、细胞增殖与凋亡研究等。

注意事项

实验安全：病毒操作需在相应生物安全等级的实验室中进行。

稳定性监测：长期传代后，荧光素酶的表达可能减弱，需定期检测发光活性。

底物选择：萤火虫荧光素酶常用底物为 D - 荧光素，海肾荧光素酶常用腔肠素，不可混用。

对照设置：实验中需设置未标记的亲本细胞作为阴性对照，以排除背景干扰。

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