血液与质粒DNA提取试剂盒的原理与特点及操作对比！

 

百欧博伟生物：从血液中提取“基因组DNA”和从细菌中提取“质粒DNA”。它们原理和操作不同，但都属于核酸提取范畴。以下结合当前实验室常用试剂盒类型，整理关键信息仅供参考：

 

一、血液基因组DNA提取试剂盒（用于提取血液中的宿主DNA）

 

这类试剂盒专门用于从全血、血清、血细胞或组织样本中提取基因组DNA，适用于人类或动物样本分析。

 

典型试剂盒组成与操作特点：

 

原理：

 

高盐条件下硅胶膜特异性吸附DNA，低盐/水溶液洗脱。

 

无需酚氯仿抽提，避免有机溶剂风险。

 

适用样本：

 

抗凝全血（EDTA/肝素/柠檬酸钠抗凝）、血液黄层、培养细胞等。

 

起始体积：0.1 mL ~ 20 mL。

    

关键步骤：

 

裂解红细胞与白细胞 → 蛋白酶消化 → 结合硅胶柱 → 乙醇洗涤 → 低盐缓冲液洗脱。

 

二、质粒DNA提取试剂盒（用于从细菌中提取质粒DNA）

 

这类试剂盒专为从培养的细菌（如大肠杆菌）中分离质粒DNA设计，常见于分子克隆实验。

 

典型类型与操作流程：

 

碱裂解法（最常用）：

 

原理：利用pH变化选择性沉淀染色体DNA，质粒DNA留在溶液中再纯化。

 

试剂盒代表：

 

柱式质粒抽提试剂盒*：15~20分钟完成，含RNase A、裂解液、中和液及硅胶柱。

 

质粒小量试剂盒：适合1~4 mL菌液，可提取≤20 μg质粒。

 

一步法改良试剂盒：

 

合并重悬、裂解、中和步骤，10分钟内完成。

 

磁珠法：

 

利用磁珠特异性结合DNA，免离心，适合高通量。

 

关键操作注意事项：

 

裂解时间需精确控制（一般≤5分钟），防止质粒损伤。

 

漂洗液需预加乙醇。

 

洗脱时用Tris缓冲液（pH 8.0~8.5）比用水得率高。

 

三、两类试剂盒的区别与选择建议

 

特性      血液gDNA提取试剂盒   质粒DNA提取试剂盒

 

目标核酸  基因组DNA（宿主细胞）质粒DNA（细菌内）

 

样本类型  血液、组织、细胞     细菌培养液

 

核心原理  硅膜吸附法           碱裂解+硅柱/磁珠纯化

 

时间      30~90分钟           10~30分钟

 

毒性      无酚氯仿            含SDS/碱（需防护）

 

四、选型与操作建议

 

血液gDNA提取：若样本为血液且需分析人类/动物基因，选血液基因组试剂盒。

 

细菌质粒提取：若需从菌液中提取质粒，选碱裂解柱式试剂盒。

 

关键贴士：

 

质粒提取时，菌体培养需处于平台期（过夜培养为佳）以提高得率。

 

洗脱前彻底去除乙醇残留，否则抑制下游酶反应。

 

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