细胞培养中如何避免交叉污染？应急措施有哪些？

 

百欧博伟生物：在细胞培养中避免交叉污染需从实验室管理、操作规范、设备维护等多维度综合防控。以下是基于最新研究与实践总结的五大核心策略：

 

一、实验室空间与设备管理

 

1、区域分隔与专用设备

 

不同细胞系划分独立操作区，贴专用标识（如颜色标签），使用独立移液器、离心机等设备。

 

培养箱内设置物理隔板或专用托盘，不同细胞系之间保持10cm以上间距，避免气溶胶传播。

 

2、关键设备维护

 

水浴锅：每周更换无菌水并添加0.1%硫酸铜溶液，金属浴设备优先用于细胞复苏。

 

培养箱：每周清理水盘并高压灭菌，每月用含1%过氧化氢的湿巾彻底消毒内壁。

 

二、细胞株身份验证

 

1、来源控制

 

仅从ATCC、DSMZ等权威机构获取细胞株，要求提供STR鉴定报告（人源细胞）或核型分析报告（小鼠细胞）。

 

新引入细胞株需隔离培养3代，完成支原体检测和STR验证后再进入常规培养。

 

2、定期鉴定

 

每3个月对常用细胞系进行STR分型检测，发现异常立即停用并溯源。

 

融合细胞系（如EA.hy926）需额外进行种属特异性PCR验证。

 

三、操作流程规范化

 

1、无菌操作强化

 

接触不同细胞前需更换手套，操作台面喷洒70%乙醇并静置30秒挥发。

 

使用带滤芯的移液器吸头，禁止跨区传递未密封培养容器。

 

2、耗材与试剂管理

 

分装培养基时标注细胞系名称及分装日期，单瓶使用周期不超过2周。

 

冻存管开启前用75%乙醇浸泡5分钟，冻存液现用现配并添加1%双抗（仅限短期使用）。

 

四、污染监控体系

 

1、交叉污染快速检测

 

每月随机抽取5%培养物进行短串联重复序列（STR）分析。

 

使用Hoechst 33258荧光染色法筛查支原体污染（与交叉污染常伴随发生）。

 

2、环境生物负载监测

 

在超净台角落放置含10%胎牛血清的TSB培养基，48小时后观察浊度评估无菌状态。

 

培养箱内置沉降菌检测平板，每周检测菌落形成单位（CFU）。

 

五、应急处置预案

 

1、污染确认与隔离

 

发现交叉污染立即停止操作，受污染细胞用0.5%次氯酸钠溶液浸泡24小时后高压灭菌。

 

污染区域紫外线照射4小时，通风系统开启HEPA过滤循环。

 

2、系统消杀

 

采用诺福杀孢子剂（含过氧化氢和过氧乙酸）对培养箱进行熏蒸处理。

 

受污染细胞系相关试剂全部废弃，未开封试剂需经0.1μm滤膜过滤验证。

 

特殊场景建议：

 

干细胞与肿瘤细胞共培养时，优先使用Transwell体系物理隔离；

 

珍贵细胞株建议建立"种子库-工作库"二级保藏体系，每半年复苏验证。

 

欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！