药品微生物学检验技术的对象与分类及法规依据与发展趋势！

 

百欧博伟生物：药品微生物学检验技术是用于监测药品及其生产相关环节中微生物污染情况，确保药品质量与用药安全的关键技术体系。其核心目的是通过科学方法检测药品中微生物的种类、数量及污染风险，防止因微生物污染导致药品变质、药效降低或引发患者感染。

 

一、检验对象

 

药品微生物学检验的对象广泛，涵盖药品全生命周期及生产链条，主要包括：

 

药品本身：原料（如中药材、化学原料药）、辅料（如淀粉、防腐剂）、制剂（如注射剂、口服片剂、软膏剂等）。

 

生产相关环节：生产环境（空气、表面）、生产设备、包装材料、操作人员手部及衣物卫生等（这些环节的微生物污染是药品污染的重要源头）。

 

二、常用检验技术分类

 

根据技术原理和发展阶段，可分为传统检验技术和现代快速检验技术。

 

（一）传统检验技术（经典方法，药典主要收录）

 

传统方法基于微生物的培养特性，虽耗时较长（通常需 2-7 天），但因稳定性和可靠性，仍是各国药典的法定方法。

 

1、微生物计数

 

用于测定药品中活菌总数，评估总体污染水平，包括：

 

总活菌数计数：采用平板倾注法或涂布法，将样品稀释后接种至营养琼脂培养基，30-35培养 48-72 小时，计数菌落数（CFU/g 或 CFU/mL）。

 

霉菌和酵母菌计数：使用沙氏葡萄糖琼脂培养基，20-25培养 5-7 天，计数真菌菌落，避免真菌代谢产物（如毒素）对人体的危害。

 

2、控制菌检查

 

针对可能存在的致病菌（如大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌等）进行定性检测，确保药品中不含特定致病菌。

 

原理：通过选择性培养基（如麦康凯琼脂用于筛选革兰氏阴性菌）和特异性生化反应（如大肠杆菌的靛基质试验），结合形态观察确认目标菌。

 

示例：注射剂需检查金黄色葡萄球菌（易引发化脓感染）、铜绿假单胞菌（易导致伤口感染）等。

 

3、无菌检查

 

针对“无菌制剂”（如注射剂、植入剂、眼用制剂等）的关键检验，要求样品中不得检出任何活菌。

 

方法：将样品接种至硫乙醇酸盐流体培养基（需氧和厌氧菌）和改良马丁培养基（真菌），培养 14 天（中国药典要求），观察是否有菌生长（如浑浊、产气、菌落形成）。

 

关键：需在无菌操作环境（如隔离器、生物安全柜）中进行，避免环境微生物干扰。

 

（二）现代快速检验技术（弥补传统方法耗时缺陷）

 

随着药品生产效率提升和风险控制需求，快速检测技术逐渐应用，可将检测时间缩短至数小时至 1 天，主要包括：

 

1、分子生物学技术

 

基于微生物核酸（DNA/RNA）的特异性检测，灵敏度高（可检测单个拷贝基因）。

 

PCR 技术：通过扩增特定微生物的保守基因（如大肠杆菌的 uidA 基因），实现定性或定量检测；实时荧光定量 PCR（qPCR）可通过荧光信号强度定量微生物数量。

 

基因芯片技术：将多种微生物的特异性探针固定在芯片上，一次可检测数十至数百种微生物，适合多目标筛查。

 

2、免疫学技术

 

利用抗原 - 抗体特异性结合检测目标微生物，操作简便。

 

酶联免疫吸附试验（ELISA）：将微生物抗原（或抗体）固定在板上，通过酶标记的抗体（或抗原）显色，根据吸光度判断是否存在目标菌（如检测沙门氏菌）。

 

免疫层析试纸条：快速可视化检测，适合现场筛查（如金黄色葡萄球菌肠毒素检测）。

 

3、仪器与物理化学方法

 

ATP 生物发光法：活菌含有的 ATP（三磷酸腺苷）可与荧光素 - 荧光素酶反应产生发光，通过发光强度快速定量活菌总数（15-30 分钟出结果），常用于生产环境卫生监控。

 

流式细胞术（FCM）：通过荧光标记活菌，流式细胞仪计数荧光信号细胞，实现快速活菌定量。

 

基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱：通过分析微生物蛋白质指纹图谱，快速鉴定微生物种类（1-2 小时），替代传统生化鉴定（需 2-3 天）。

 

三、检验关键环节

 

1、样品采集与处理

 

样品需具有代表性（如随机抽样、覆盖不同批次 / 包装）；

 

若药品含抑菌成分（如抗生素、防腐剂），需通过稀释、添加中和剂或薄膜过滤（截留微生物，去除抑菌成分）消除干扰。

 

2、培养基与试剂质量控制

 

培养基需验证无菌性、适用性（如对目标菌的促生长能力）；

 

试剂（如染色液、抗体）需校准有效期和灵敏度。

 

3、结果验证

 

设立阳性对照（已知目标菌）和阴性对照（无菌样品），确保方法有效性；

 

对可疑结果需重复试验或采用其他方法交叉验证（如传统培养 + PCR 确认）。

 

四、法规依据

 

药品微生物检验需严格遵循各国药典及法规标准，核心依据包括：

 

中国药典（ChP）：四部收载“微生物限度检查法”“无菌检查法”“控制菌检查法”等；

 

美国药典（USP）：<61> 微生物计数、<62 > 控制菌、<71 > 无菌检查；

 

欧洲药典（EP）：2.6.12 微生物计数、2.6.13 控制菌、2.6.1 无菌检查。

 

五、发展趋势

 

自动化与智能化：全自动微生物鉴定系统、AI 辅助结果判读，减少人为误差；

 

多目标同步检测：芯片技术、多重 PCR 实现一次检测多种致病菌；

 

现场快速检测：便携设备（如手持 ATP 检测仪）用于生产车间实时监控；

 

风险预警结合：通过大数据分析生产环节微生物污染规律，提前预防风险。

 

药品微生物学检验技术是药品质量安全的“防火墙”，其发展既依赖于基础微生物学的进步，也需紧密结合制药工业的实际需求，最终实现对药品微生物污染的精准、高效控制。

 

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