检验技术——软琼脂法实验服务的周期和操作流程！

软琼脂法实验服务周期及流程

软琼脂法实验是一种测定细胞转化及致瘤性的实验方法。该实验需要细胞锚定非依赖性生长状态（肿瘤细胞生长特性）。相比于2D单层培养，该3D培养法的生长条件可以更准确地反映出癌细胞的自然生长环境，因此动物实验进行之前的软琼脂法实验是至关重要的。实验前，将细胞（用致癌物质或致癌物抑制剂处理的）于软琼脂培养21-28天。而后，克隆子可经细胞染色法进行形态学分析并且计数。

实验流程：

1、基层琼脂

2、在基层琼脂上加入细胞琼脂，培养6-8天

3、形成克隆子

4、溶解琼脂（形成均质细胞悬液）

5、细胞溶解并检测

如何作好软琼脂实验分析？

软琼脂(soft agar)实验一般用来检测细胞的集落形成能力。现在这种方法越来越多的用于分离癌细胞，也可以用来确认癌细胞是否具有癌化特性，为进一步做肿瘤小鼠移植 模型奠定理论基础。该方法看似简单，但如果细节掌握不好，往往导致实验失败或数据缺乏说服力。如果你曾经在这个实验上栽了跟头，请不妨在如下几个方面进行尝试：

1、要确保在整个实验过程中所使用的琼脂处于完全液体状态（>80），尤其是在做基底时，如果琼脂凝固过快会导致基底不均一；

2、做琼脂基底是应避免产生小气泡，一旦有小气泡产生，应该立即将气泡赶走；

3、应使用2倍浓度的培养基，并加入20S 和2%的P/S；

4、在制备上层时，混合液体需要有顺序，一般为在同一个移液管中先吸取液态琼脂，再吸取同体积的2倍浓度的培养基，最后在吸取2倍体积的细胞悬液，这样既可以保证琼脂不立即固化，又可以有效避免细胞因温度过高而烫死；

5、因为该实验周期较长，为避免过度蒸发而导致琼脂裂解，需要保证小环境持久湿润，一般可在六孔板或培养皿下面垫上三到四层湿润的薄纸。

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