耐热大肠菌群数的检测方法之传统培养法和快速检测法！

 

耐热大肠菌群数的检测方法主要基于其在特定温度（通常为 44.5）下生长繁殖的特性，通过培养、观察特征性反应来计数或定性判断。常见方法可分为传统培养法和快速检测法，具体如下：

 

一、传统培养法（国标常用方法）

 

这类方法通过培养基选择性培养和生化反应验证，操作相对经典，结果可靠性高，是多数国家标准的指定方法。

 

1、多管发酵法

 

原理：利用不同浓度的水样接种到含乳糖的选择性培养基（如乳糖蛋白胨培养液）中，在 44.5±0.5条件下培养，观察是否产酸产气（提示耐热大肠菌群存在），再通过统计学查表（最可能数法，MPN 法）计算水样中耐热大肠菌群的数量（单位：MPN/100mL）。

 

步骤：

 

取不同体积的水样（如 10mL、1mL、0.1mL 等）分别接种到多组发酵管中；

 

44.5培养 24~48 小时，观察产酸产气情况（初发酵）；

 

对阳性管转种到伊红美蓝琼脂（EMB）或远藤琼脂等选择性培养基上，44.5培养后观察菌落形态（复发酵）；

 

结合生化试验（如靛基质试验）确认，最终根据阳性管数量查 MPN 表得出结果。

 

适用场景：适用于各类水样（如饮用水、地表水等），尤其适合浑浊或含杂质较多的水样，但操作较繁琐，耗时较长（需 3~5 天）。

 

2、滤膜法

 

原理：将水样通过孔径为 0.45μm 的滤膜过滤，截留水中的耐热大肠菌群；将滤膜置于选择性培养基上，44.5培养 24~48 小时，计数特征菌落（如 MFC 琼脂上呈蓝色或蓝绿色的菌落）。

 

步骤：

 

水样过滤后，将滤膜正面朝上贴在 MFC 琼脂平板上；

 

44.5培养后，直接计数符合耐热大肠菌群特征的菌落数，结果以“个 / 100mL”表示。

 

适用场景：适用于较清洁的水样（如饮用水、经过处理的污水），操作相对简便，可直接计数菌落，结果直观，但对浑浊或含悬浮颗粒多的水样易堵塞滤膜，影响检测。

 

二、快速检测法（现代技术辅助方法）

 

这类方法通过生化反应显色、分子生物学或仪器分析等技术，缩短检测时间，提高效率，适用于快速筛查或批量检测。

 

1、酶底物法

 

原理：利用耐热大肠菌群含有的 β- 半乳糖苷酶，可分解特定底物产生显色或荧光物质，通过颜色变化或荧光强度判断是否存在该菌群，并可通过定量接种计算数量。

 

特点：操作简便，无需转种和生化试验，44.5培养 24 小时内即可判断结果，适用于现场快速检测或大量样本筛查，部分方法已被纳入国标。

 

2、免疫学法

 

原理：利用特异性抗体与耐热大肠菌群的抗原结合，通过酶联免疫吸附试验（ELISA）或免疫荧光技术，定性或定量检测目标菌群。

 

特点：特异性较高，检测时间可缩短至数小时，但成本较高，易受交叉反应影响，适用于应急检测。

 

3、分子生物学方法

 

原理：通过聚合酶链反应（PCR）扩增耐热大肠菌群特有的基因片段，通过扩增产物的有无或浓度判断菌群存在及数量（实时荧光 PCR 可定量）。

 

特点：灵敏度极高，可在数小时内完成检测，能区分不同菌种，但对操作环境和技术要求高，易受抑制物干扰，常用于实验室精确检测或溯源分析。

 

4、仪器自动检测法

 

原理：利用自动化微生物检测系统（如基于浊度、代谢产物或荧光信号的检测仪），结合特定培养基和温度控制，自动监测耐热大肠菌群的生长曲线，实现快速定量。

 

特点：自动化程度高，减少人为误差，可同时检测多个样本，适用于大型实验室或批量检测，但仪器成本较高。

 

三、方法选择依据

 

国家标准要求：我国《生活饮用水标准检验方法》（GB/T 5750.12-2023）中，推荐多管发酵法、滤膜法和酶底物法作为耐热大肠菌群的检测方法，可根据水样类型和检测需求选择。

 

检测目的：传统方法适合精准计数和官方检测，快速方法适合应急筛查或大规模样本初筛。

 

水样特性：清洁水样优先选滤膜法，浑浊水样适合多管发酵法，快速检测可选酶底物法或 PCR 法。

 

不同方法在灵敏度、特异性、耗时和成本上各有优劣，实际应用中需结合检测需求和条件选择合适的方法。

 

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