未用完的培养基应如何保存?具体的操作方法有哪些?
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百欧博伟生物:未用完的培养基(包括灭菌后未倒平板的液体培养基、已倒平板但未使用的固体培养基)需根据状态和类型,采取针对性的保存措施,以避免污染、营养成分降解或物理性状改变,具体方法如下:
一、液体培养基(未分装、未倒平板)的保存
1、灭菌后立即处理
灭菌后的液体培养基需在室温下冷却至 40-50(避免高温导致容器内压力变化),立即密封(如三角瓶用灭菌的硅胶塞或封口膜密封),防止冷却过程中吸入空气中的微生物。
若暂时不使用,需冷藏保存:4冰箱中存放,避免冷冻(冷冻会破坏培养基胶体结构,解冻后可能分层或凝固)。
2、保存期限与注意事项
普通营养培养基(如 LB、营养肉汤):4下密封保存不超过 1 周,富含碳水化合物、蛋白质的培养基(如 TCBS、庖肉培养基)需缩短至 3-5 天,避免营养成分降解或滋生污染菌(即使未开封,低温下仍可能有嗜冷菌繁殖)。
再次使用前:观察培养基是否有浑浊、沉淀、颜色变化(如 pH 改变导致变色),若出现异常需废弃;使用时需重新加热熔化(固体培养基)或直接取用(液体),加热时避免反复煮沸(防止营养成分破坏)。
二、固体培养基(已倒平板,未使用)的保存
1、凝固后及时倒置
倒平板后待培养基完全凝固(约 30-60 分钟,室温下),立即倒置存放(培养基面朝下),避免盖子内侧的冷凝水滴落污染培养基表面。
2、密封与避光
单皿保存:用 parafilm 封口膜缠绕培养皿边缘(仅缠绕 1-2 圈,留微小缝隙平衡气压),防止水分过度蒸发导致培养基干裂。
批量保存:将多个平板放入无菌保鲜盒或密封袋中,盒内可放 1-2 张湿润滤纸(避免过度干燥),但需确保滤纸不接触培养基表面。
避光:对光敏感的培养基(如含维生素、指示剂的培养基,如 SS 琼脂、麦康凯琼脂)需用不透光容器或黑布包裹,避免光照导致成分分解(如维生素 B 族易被光破坏)。
3、储存条件与期限
温度:4冰箱冷藏(避免冷冻,否则解冻后培养基易碎裂)。
期限:普通固体培养基(如营养琼脂)保存不超过 1 周;选择性培养基因含抑菌剂,可延长至 2 周,但需提前检查是否有抑菌效果下降(如对照菌生长异常)。
复用时:取出后室温平衡 30 分钟,观察培养基表面是否干燥、污染(如有菌落或霉斑需废弃),干燥的平板可滴加 1-2 滴无菌水(沿边缘),避免接种时样品脱水。
三、特殊类型培养基的保存
1、选择性 / 鉴别培养基
含抗生素的培养基(如氨苄青霉素 LB 平板):抗生素需在培养基灭菌后冷却至 50-60时加入(避免高温破坏抗生素),保存时需更严格密封,4下不超过 1 周(抗生素易降解失效)。
含血液、血清的培养基(如血琼脂):需在无菌条件下添加脱纤维羊血(5-10%),保存不超过 3 天,且避免反复冻融(血液成分易变性)。
2、微量培养基(如 96 孔板)
密封后用铝箔包裹(防潮、避光),4保存,期限不超过 1 周;若需长期保存(1 个月内),可 - 20冷冻,但需避免反复冻融(建议分装为单次用量)。
四、通用注意事项
标记清晰:在容器或平板上标注培养基名称、灭菌 / 制备日期、保存人,便于追溯和优先使用旧批次(“先进先出”原则)。
定期检查:每周查看保存的培养基,剔除污染、变质(如浑浊、变色、干裂)的批次,避免误用。
避免反复开盖:液体培养基取用后立即盖紧,固体平板尽量整盒取出,减少单皿暴露在空气中的时间。
通过以上方法,可最大限度保持未用完培养基的无菌性和营养活性,降低实验成本并减少污染风险。
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