蜡样芽孢杆菌显色培养基的倒平板技巧与注意事项！

 

 

百欧博伟生物：掌握蜡样芽孢杆菌显色培养基的倒平板技巧对于获得清晰、可靠的检测结果至关重要。以下是一些关键技巧和注意事项：

 

核心原则：无菌操作、温度适宜、厚度均匀、表面干燥

 

1、培养基准备与温度控制：

 

彻底融化：将冷冻或冷藏的显色培养基完全融化。可以置于沸水浴、微波炉（低功率、间歇加热）或45-50°C水浴中。确保融化均匀，无凝块。

 

冷却至关键温度：这是最重要的一步！将融化后的培养基冷却至45-50°C 再倒平板。

 

温度过高 (>55°C)：会烫死或损伤后续接种的样品中可能存在的蜡样芽孢杆菌（尤其是营养体），导致假阴性或菌落生长不良、显色异常。

 

温度过低 (<45°C)：培养基会过早凝固，导致倒板不平、厚度不均，甚至无法顺利倒出或在平皿中形成凝块。

 

混匀：在冷却过程中或倒板前，轻柔地旋转或摇晃培养基瓶，确保成分均匀混合，避免沉淀（特别是显色底物和选择性抑制剂）。避免剧烈摇晃产生气泡。

 

2、无菌操作：

 

整个过程必须在超净工作台或酒精灯火焰的无菌区域内进行。

 

所有接触培养基的物品（瓶口、平皿、三角瓶等）在操作前都需要用70%酒精消毒并通过火焰灭菌。

 

打开培养基瓶盖和平皿盖时，动作要快，瓶口/皿盖始终保持在火焰的无菌区上方（但不能直接在火焰上烤，以免过热）。

 

倾倒时，瓶口不要触碰到平皿边缘或内部。

 

3、倒平板技巧：

 

平皿放置：将灭菌的一次性塑料平皿或洁净干燥的玻璃平皿水平放置在超净台台面上。确保台面水平。

 

倾倒动作：

 

拿起冷却至合适温度的培养基瓶，迅速在火焰旁打开瓶盖。

 

将瓶口在火焰上短暂灼烧灭菌。

 

抬起平皿盖至刚好能插入瓶口的程度（约45度角）。

 

将培养基沿平皿内壁缓缓倒入，不要直接倒在平皿中央。这样可以减少气泡产生。

 

控制倾倒量：对于标准的90mm直径平皿，通常倒入约15-20mL培养基。目标是形成厚度均匀（约3-4mm）的平板。太薄可能导致菌落蔓延、显色弱或干裂；太厚则浪费，且可能影响气体交换和观察。

 

避免气泡：倾倒要平稳流畅。如果产生气泡，可以用火焰在平皿表面快速、轻微地扫过一下（注意距离，不要烤熔塑料平皿或使培养基过热），通常能使气泡破裂。或者用无菌移液枪头轻轻戳破气泡（但需非常小心避免污染）。

 

4、凝固与干燥：

 

水平静置凝固：倒好培养基后，立即盖上皿盖（不要完全盖严，留一小缝防止冷凝水过多），将平皿水平静置在凉爽、无振动的台面上，让其自然凝固。凝固过程中切勿移动或倾斜平皿，否则会导致厚度不均。

 

表面干燥：凝固后，通常平板表面会有少量冷凝水珠。

 

使用前需干燥：必须让冷凝水蒸发掉才能进行涂布或划线接种，否则菌液会随水扩散，导致菌落蔓延成片，无法计数或分离。

 

干燥方法：

 

将凝固好的平板倒扣（盖在下，底在上）放入35-37°C培养箱中，半开皿盖放置15-30分钟（时间根据湿度调整，观察表面无水珠即可）。这是最常用、效果较好的方法。

 

在超净台内，半开皿盖，让层流风吹干（时间较长，需注意无菌）。

 

切勿在室温下敞开皿盖干燥过夜，极易造成污染！

 

5、储存：

 

干燥好的平板如不立即使用，应正放（底在下，盖在上），用无菌塑料袋密封或叠放在密封盒中。

 

避光冷藏：储存于2-8°C冰箱中，并注意避光（显色底物可能对光敏感）。

 

标注信息：在平皿底部边缘清晰标注培养基名称、配制/倒板日期、批号。

 

有效期：遵循制造商说明书建议的有效期使用。通常冷藏保存不超过1个月，使用前检查有无污染、脱水或开裂。

 

针对蜡样芽孢杆菌显色培养基的特别注意事项：

 

温度敏感性：再次强调，蜡样芽孢杆菌的营养体对热敏感。倒板温度过高是导致假阴性的常见原因之一。务必使用温度计确认培养基温度在45-50°C范围内。

 

避免过度加热/反复冻融：显色底物和选择性抑制剂可能对热不稳定。避免培养基长时间处于高温或反复冻融，这可能导致显色效果变差或选择性降低。

 

厚度均匀性：蜡样芽孢杆菌菌落有时会呈现一定的扩散性。均匀的平板厚度有助于形成规则、边界清晰的菌落，方便观察显色反应和计数。

 

表面干燥度：蜡样芽孢杆菌在湿润表面更容易蔓延。确保平板表面完全干燥是获得分散单菌落的关键。

 

总结关键步骤：

 

融化培养基至完全液态。

 

冷却至 45-50°C (实测温度！)。

 

无菌操作下，沿壁缓缓倒入水平放置的平皿中 (~15-20mL/90mm皿)。

 

水平静置至完全凝固。

 

倒扣，半开盖，37°C培养箱干燥 15-30分钟至表面无水珠。

 

密封，避光冷藏保存，标注信息，在有效期内使用。

 

遵循这些技巧，你将能制备出表面光滑、厚度均匀、干燥无菌的蜡样芽孢杆菌显色平板，为后续的样品检测提供可靠的基础。

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