麦芽提取物琼脂的工作原理与使用方法及注意事项!
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技术方法注意事项 |
分类: 培养基 |
一、原理
麦芽提取物琼脂是一种选择性培养基,主要用于真菌(如酵母和霉菌)的分离和培养。其原理基于以下成分和作用:
麦芽提取物:提供碳源(如麦芽糖、葡萄糖)、氮源及维生素,支持真菌生长。
琼脂:作为凝固剂,形成固体培养基便于菌落观察。
选择性抑制(可选):
添加 氯霉素(50–100 mg/L)抑制细菌生长,避免干扰。
酸性环境(pH 5.4–5.6)进一步抑制细菌,促进真菌增殖。
二、使用方法
1、培养基配制
配方(以1 L为例):
麦芽提取物:30 g
琼脂:15 g
氯霉素(可选):0.05–0.1 g(溶于乙醇后加入)
蒸馏水:定容至1 L
步骤:
a.将麦芽提取物和琼脂加入水中,搅拌溶解。
b.加热煮沸至完全溶解(避免焦糊)。
c.若添加氯霉素,待培养基冷却至约50°C时加入(防止高温失活)。
d.调节pH至5.4–5.6(用稀盐酸或氢氧化钠)。
2、灭菌与倒平板
高压灭菌:121°C、15–20分钟(仅灭菌基础成分,氯霉素需过滤除菌后添加)。
冷却至约50°C后倾注无菌培养皿,厚度约3–4 mm,静置凝固。
3、接种与培养
接种方法:
涂布法:适用于液体样本。
划线法:用于分离纯菌落。
点植法:观察霉菌菌丝扩展。
培养条件:
温度:25–28°C(多数真菌)或37°C(部分病原性酵母)。
时间:3–7天,高湿度环境防止干燥。
4、结果观察
酵母菌:形成乳白色湿润菌落。
霉菌:产生绒毛状或粉末状菌落,可能伴随孢子颜色变化。
三、注意事项
无菌操作:避免污染,尤其在添加氯霉素时。
储存:配制后培养基可冷藏(2–8°C),1个月内使用。
安全:高压灭菌时规范操作,防止烫伤;处理真菌孢子时需在生物安全柜中进行。
四、应用场景
食品、环境样本中真菌检测。
实验室保存真菌菌种或研究其形态特征。
与其他培养基的区别
与PDA(马铃薯葡萄糖琼脂)对比:MEA麦芽糖含量更高,更利于某些酵母(如酿酒酵母)生长;PDA适合广泛真菌,尤其霉菌。
通过以上步骤,麦芽提取物琼脂可高效分离和培养真菌,是微生物学研究的常用工具。
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