阴沟肠杆菌分离琼脂（ECIA）的设计原理及使用方法！

 

阴沟肠杆菌分离琼脂（ECIA，Enterobacter cloacae Isolation Agar）是一种用于选择性分离和鉴别阴沟肠杆菌的培养基，其设计基于阴沟肠杆菌的生化特性，能在复杂样本中快速筛选目标菌株。以下从原理和使用方法两方面详细介绍：

 

一、ECIA 的设计原理

 

ECIA 的核心原理是通过选择性抑制剂抑制杂菌生长，同时利用阴沟肠杆菌特有的生化反应进行鉴别，具体如下：

 

1、选择性成分

 

培养基中添加了特定抗生素（如头孢菌素类）或化学抑制剂，可抑制革兰氏阳性菌、其他非目标革兰氏阴性菌（如大肠杆菌、沙门氏菌等）的生长，仅允许阴沟肠杆菌等少数耐药菌株存活。

 

2、鉴别成分

 

阴沟肠杆菌能产生β- 半乳糖苷酶和鸟氨酸脱羧酶等特异性酶，ECIA 中加入对应的底物（如鸟氨酸）和指示剂（如酚红）：

 

若菌株能分解 ONPG（邻硝基苯 -β-D - 半乳糖苷），会产生黄色产物；

 

鸟氨酸脱羧酶可分解鸟氨酸产生碱性物质，使培养基 pH 升高，指示剂酚红由黄变红。

 

因此，阴沟肠杆菌在 ECIA 上通常形成黄色或橙红色、边缘整齐的菌落，而其他细菌可能不生长或形成颜色不同的菌落（如无色、粉色）。

 

二、ECIA 的使用方法

 

1、培养基准备

 

储存条件：成品 ECIA 平板需在 2-8避光保存，避免冻结或反复升温，保质期通常为 1 个月。

 

预热：使用前将平板从冰箱取出，室温放置 30 分钟，避免冷凝水影响接种。

 

2、样本接种

 

样本类型：适用于临床标本（如尿液、血液、痰液）、环境样本（如水、土壤）或食品样本等。

 

接种方法：

 

固体样本：用无菌接种环取少量样本，在平板表面划线（如分区划线法），确保菌落分散。

 

液体样本：取 0.1-0.2mL 样本，用 L 型玻璃棒均匀涂布于平板表面。

 

注意：接种后需待样本吸收片刻，再倒置培养。

 

3、培养条件

 

温度：35-37（阴沟肠杆菌最适生长温度）。

 

时间：18-24 小时（若菌落不明显，可延长至 48 小时，但需注意杂菌污染）。

 

环境：需有氧培养（阴沟肠杆菌为兼性厌氧菌，有氧条件下生长更佳）。

 

4、结果判读

 

典型菌落：阴沟肠杆菌在 ECIA 上通常为圆形、光滑、边缘整齐的黄色或橙红色菌落（直径 1-3mm），周围培养基可能变色（如黄色晕圈）。

 

非典型菌落：其他细菌可能不生长，或形成无色、粉色、白色等非特征性菌落，需进一步鉴定。

 

5、后续鉴定

 

对疑似阴沟肠杆菌菌落，需通过生化试验、质谱分析或分子生物学方法确认种属，避免与其他肠杆菌科细菌（如阪崎肠杆菌、肺炎克雷伯菌）混淆。

 

三、注意事项

 

操作需严格无菌，避免污染环境或样本。

 

若培养基出现干裂、霉斑或颜色异常（如背景色变深），需废弃不用。

 

阴沟肠杆菌可能存在变异株，部分菌株生化特性不典型，需结合其他鉴定方法确认。

 

通过以上步骤，可利用 ECIA 快速分离并初步鉴别阴沟肠杆菌，为临床诊断、环境监测或食品安全检测提供依据。

 

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