核糖醇发酵管的核心成分与接种操作及结果判断!
(2025-10-14 15:18:17)
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核糖醇发酵管是微生物学中用于检测微生物能否发酵核糖醇(一种多元醇类碳水化合物)的生化反应管,通过观察发酵过程中是否产酸、产气,辅助微生物的鉴定(尤其常用于肠道杆菌等的分类鉴别)。以下详细介绍其原理和使用方法:
一、原理
1、核心成分:
发酵管内含核糖醇(作为唯一碳源)、酸碱指示剂(如溴甲酚紫,中性时呈紫色,酸性时呈黄色),部分管内还会加入倒置的小倒管(用于检测是否产气)。
2、反应逻辑:
若微生物具有分解核糖醇的酶系,可通过发酵作用将核糖醇分解为丙酮酸等中间产物,进一步代谢产生有机酸(如乳酸、乙酸),导致培养基 pH 下降。
若产酸:指示剂由紫色变为黄色(阳性)。
若同时产气:倒置小倒管内会积聚气泡(产气阳性)。
若微生物不能分解核糖醇,则培养基保持紫色,无气泡(阴性)。
二、使用方法
1、准备工作
发酵管:采用灭菌的含糖醇发酵管(液体培养基),确保倒置小倒管内无气泡(若有气泡需重新灭菌排气)。
待检菌:纯培养的新鲜菌落(培养 18-24 小时,保证活性)。
2、接种操作
用灭菌接种环挑取单个纯菌落,轻轻伸入发酵管液体中,研磨混匀(避免试管口污染)。
每株菌至少接种 1 支,同时设置未接种的空白对照管(观察是否污染)。
3、培养
将接种后的发酵管置于35-37恒温培养箱中培养。
观察时间:多数菌在 24-48 小时内出现结果;若为阴性,需延长至 7 天(部分菌发酵缓慢)。
4、结果判断
产酸:培养基由紫色变为黄色(+);不变色(-)。
产气:倒置小倒管内有气泡(不论气泡大小,只要可见即为 +);无气泡(-)。
结果记录格式:例如“产酸产气(A+G+)”“只产酸(A+G-)”“不发酵(A-G-)”。
三、注意事项
接种时需严格无菌操作,避免杂菌污染导致假阳性。
若培养时间不足(如 24 小时内阴性),不可直接判定为阴性,需延长培养至 7 天。
部分细菌可能仅微弱产酸,需仔细对比对照管判断颜色变化(避免误判)。
不同微生物对核糖醇的发酵能力具有特异性,例如某些沙门氏菌可发酵核糖醇,而志贺氏菌多为阴性,可作为鉴别依据。
通过核糖醇发酵试验,可结合其他生化反应(如葡萄糖发酵、乳糖发酵等),更精准地对微生物进行分类鉴定。
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