实验室真菌污染的常见来源与识别方法及处理与预防策略！

 

百欧博伟生物：实验室中真菌污染是常见的微生物污染问题，不仅会干扰实验结果（如影响细胞培养、微生物分离纯化、酶活性测定等），还可能对实验人员健康造成潜在威胁（如引发过敏、呼吸道不适）。以下从污染的常见来源、识别方法、处理措施及预防策略四个方面详细说明，帮助有效应对实验室真菌污染。

 

一、真菌污染的常见来源

 

真菌污染多通过空气、实验材料、操作工具或人员带入，常见源头包括：

 

空气传播：真菌孢子（如曲霉、青霉、毛霉的孢子）可通过通风系统、门窗开合进入实验室，尤其在潮湿环境（如雨季、空调冷凝水附近）易滋生。

 

1、实验材料污染：

 

未彻底灭菌的培养基、试剂（如含天然成分的培养基，如马铃薯葡萄糖琼脂 PDA、血清等）；

 

外源性样品（如土壤、植物组织、水体样本）本身携带真菌孢子；

 

细胞或微生物菌种保藏不当，被真菌污染后扩散。

 

2、操作与环境问题：

 

超净台、生物安全柜过滤器失效（HEPA 过滤器堵塞或破损），导致空气净化不足；

 

实验台面、培养箱、冰箱等未定期消毒，残留真菌孢子；

 

实验人员操作不规范（如未戴口罩、操作时敞口放置培养皿、手接触无菌材料）。

 

二、真菌污染的识别方法

 

真菌污染在不同实验场景中表现不同，可通过外观、气味或显微镜观察判断：

 

1、微生物培养 / 培养基污染：

 

肉眼可见：培养基表面或内部出现白色、绿色、黑色、黄色等绒毛状、絮状或粉末状菌落（如青霉呈绿色绒毛，曲霉呈黑色颗粒状，毛霉呈白色棉絮状），菌落边缘多不规则，且随时间快速扩散。

 

气味：部分真菌污染会产生霉味或土腥味。

 

2、细胞培养污染：

 

培养液通常不浑浊（区别于细菌污染的浑浊），但镜下可见：

 

细胞间隙或培养液中出现丝状、树枝状菌丝（如毛霉），或圆形 / 椭圆形孢子（如酵母菌，需注意与细胞碎片区分）；

 

细胞生长受抑制（增殖减慢、形态变圆、脱落）。

 

3、环境表面污染：

 

实验台、培养箱内壁、冰箱角落等潮湿处出现霉斑（黑色、绿色点状或片状污渍），尤其在长时间未清洁的缝隙中易发现。

 

三、真菌污染的处理措施

 

发现污染后需立即处理，避免扩散，根据“污染对象”分类处理：

 

（一）已污染的实验材料 / 样品：彻底灭活，禁止随意丢弃

 

1、微生物培养物 / 培养基：

 

若为非致病性真菌（如实验室常见的曲霉、青霉），将污染样品连同容器一起放入高压蒸汽灭菌锅（121、103kPa、20-30 分钟）彻底灭菌后，再按实验室废弃物处理（放入专用医疗垃圾袋）。

 

若可能涉及致病性真菌（如新型隐球菌、组织胞浆菌，需结合样品来源判断），需在生物安全柜内操作，用含 5% 次氯酸钠的消毒液浸泡容器表面后，再灭菌处理，避免孢子扩散。

 

2、细胞培养污染：

 

立即丢弃污染的细胞培养液（倒入含消毒液的专用废液桶），培养瓶 / 皿用 75% 酒精擦拭外表面后，放入高压灭菌袋灭菌；

 

若需保留细胞系，需确认污染程度：轻度污染可尝试用抗真菌药物处理，但成功率低，且可能影响细胞活性，建议优先丢弃并重新复苏备份细胞。

 

3、污染的工具 / 容器：

 

玻璃器皿（培养皿、试管）：先浸泡在 5% 次氯酸钠或 0.2% 过氧乙酸溶液中 1-2 小时，再清洗后高压灭菌；

 

塑料耗材（移液枪头、离心管）：直接装入灭菌袋，高压灭菌后丢弃。

 

（二）污染的实验环境 / 设备：针对性消毒，杀灭孢子

 

需根据污染区域选择合适的消毒方式，重点杀灭真菌孢子（孢子对常规消毒有一定抵抗力，需用高效消毒剂）：

 

小范围表面消毒（实验台、培养箱、超净台内部）：

 

第一步：清除可见污染物：用蘸有 75% 酒精的纸巾擦掉表面霉斑（避免干擦，防止孢子飞扬），若霉斑较厚，可先用含 5% 次氯酸钠的消毒液湿润后再擦拭（次氯酸钠对孢子杀灭效果强）。

 

第二步：深度消毒：

 

用含氯消毒剂（如 500-1000mg/L 次氯酸钠溶液）、过氧乙酸（0.2%-0.5%）或季铵盐类消毒剂擦拭表面，作用 30 分钟后用无菌水或 75% 酒精二次清洁（避免残留消毒剂影响后续实验）；

 

超净台 / 生物安全柜：开启紫外灯照射 30-60 分钟（紫外可破坏真菌孢子的 DNA），同时更换内部滤网（若污染严重）。

 

培养箱 / 冰箱污染：

 

先清空内部物品，取出隔板，用 5% 次氯酸钠擦拭内壁、隔板及角落，静置 30 分钟后用清水擦净；

 

放入含氯消毒片或防霉盒，并保持内部干燥（可放一盆生石灰吸湿）；

 

培养箱可设定 40-50烘干 2-4 小时（利用高温杀灭残留孢子）。

 

空气污染处理：

 

若局部污染（如超净台内），关闭通风后用甲醛熏蒸（需按比例配置，如 10ml/m³ 甲醛溶液，密闭 6-12 小时，注意人员防护），或用过氧化氢雾化消毒（更安全，无残留）；

 

实验室整体通风：开启新风系统，关闭与外界潮湿环境的连通，必要时在空气入口放置空气净化器（带 HEPA 滤网）。

 

四、真菌污染的预防策略

 

真菌污染“防大于治”，日常需通过规范操作和环境管理减少风险：

 

（一）实验操作规范

 

1、无菌操作核心：

 

微生物 / 细胞培养时，在超净台或生物安全柜内操作，戴口罩、手套，必要时戴发帽（避免头发上的孢子掉落）；

 

培养基、试剂灭菌后需抽样验证（如 37培养 24-48 小时，观察是否长菌），天然成分培养基尽量现配现用；

 

外源性样品（如土壤、植物）处理时，先通过梯度稀释、高温处理（如 60加热 30 分钟杀灭部分真菌孢子）或选择性培养基（如加抗生素抑制真菌）降低污染风险。

 

2、工具与耗材管理：

 

移液枪、接种环等工具需彻底灭菌（接种环灼烧灭菌，移液枪头用高压蒸汽灭菌）；

 

无菌容器（培养皿、离心管）开封后需在超净台内使用，避免敞口暴露在空气中超过 10 分钟。

 

（二）环境与设备维护

 

1、定期清洁消毒：

 

实验台面：每日实验后用 75% 酒精擦拭，每周用含氯消毒剂彻底消毒 1 次；

 

培养箱、冰箱：每周清空内部，用 75% 酒精擦拭，每月用含氯消毒剂消毒 1 次，避免冷凝水堆积（培养箱内放吸水纸，及时更换）；

 

超净台 / 生物安全柜：每次使用前后用 75% 酒精擦拭台面，每月检查 HEPA 过滤器风压（低于标准时及时更换），每 3 个月请专业人员维护。

 

2、控制环境温湿度：

 

实验室湿度保持在 40%-60%（潮湿地区可使用除湿机），避免在水槽、空调附近放置培养物；

 

通风系统定期清洁（如滤网每季度清洗 1 次），雨季关闭朝阴面窗户，减少外界孢子进入。

 

（三）应急与监测

 

储备常用消毒用品（75% 酒精、次氯酸钠、过氧乙酸、紫外灯），明确存放位置和使用方法；

 

对长期培养的细胞或微生物，定期观察（如每天镜检细胞，微生物培养每天查看菌落形态），发现污染立即隔离处理，避免交叉污染；

 

若实验人员出现持续咳嗽、打喷嚏、皮肤过敏等症状，需排查是否因真菌孢子过敏，必要时检测实验室空气真菌浓度（通过空气采样培养）。

 

五、总结

 

实验室真菌污染的核心应对原则是“快速识别、彻底灭活、源头预防”。关键在于减少孢子的引入（规范操作 + 环境干燥）和及时处理污染（针对真菌孢子选择高效消毒剂，如含氯消毒剂、紫外）。对于科研实验，污染后的材料需果断丢弃（避免污染扩散或影响结果），同时通过定期维护设备和清洁环境，从根本上降低污染概率。

 

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