酚红煌绿琼脂培养基的使用前准备及结果观察与判读！

 

酚红煌绿琼脂培养基主要用于分离培养沙门氏菌（伤寒沙门氏菌除外），其使用需遵循标准化流程，以确保分离效果和结果准确性。以下是详细的使用方法：

 

一、使用前准备

 

1、培养基准备

 

确认培养基已正确制备并凝固：平板应无裂痕、无污染（无杂菌菌落），表面平整湿润但不积水。

 

若为预制平板，需在室温下平衡 15-30 分钟（避免低温影响细菌复苏）；若为自制平板，需确认灭菌彻底且凝固完全。

 

2、样品及工具准备

 

样品处理：根据检测对象（如食品、粪便、饲料等）进行前处理：

 

固体样品：需均质化后稀释（如用无菌生理盐水稀释至合适浓度）；

 

液体样品：可直接稀释或离心富集；

 

必要时先经增菌培养（如使用缓冲蛋白胨水、四硫磺酸钠煌绿增菌液），提高沙门氏菌检出率。

 

无菌工具：准备灭菌的接种环、移液器、吸头、培养皿等，避免操作污染。

 

二、接种操作

 

1、接种方法选择

 

划线接种（推荐）：用灭菌接种环蘸取少量处理后的样品（或增菌液），在培养基表面进行“分区划线”，使细菌逐渐稀释，最终形成单个菌落。

 

涂布接种：取 0.1-0.2mL 样品稀释液，滴在培养基表面，用无菌 L 型玻璃棒均匀涂布，适合样品中菌量较少的情况。

 

2、注意事项

 

接种环需在火焰上灭菌，冷却后再蘸取样品（避免高温杀死细菌）；

 

接种后避免平板倾斜，防止样品液流淌导致菌落融合。

 

三、培养条件

 

将接种后的平板倒置（防止冷凝水滴落污染菌落），放入 36±1的恒温培养箱中。

 

培养时间：18-24 小时；若菌落生长不明显，可延长至 48 小时（但需注意杂菌可能过度生长）。

 

培养环境：需氧培养（无需厌氧条件）。

 

四、结果观察与判读

 

1、菌落特征识别

 

沙门氏菌：典型菌落为粉白色、圆形、边缘整齐、表面光滑，直径约 1-2mm；菌落周围培养基因细菌不发酵乳糖/蔗糖（不产酸），酚红不变色，或因轻微产碱而呈淡红色晕圈。

 

杂菌：

 

能发酵乳糖/蔗糖的细菌（如大肠杆菌）：菌落呈黄色，周围培养基因产酸变为黄色；

 

被煌绿抑制的细菌：无菌落生长（如革兰氏阳性菌、多数非沙门氏菌革兰氏阴性菌）。

 

2、结果记录

 

记录菌落形态（颜色、大小、边缘等）、数量及培养基颜色变化；

 

若有疑似沙门氏菌菌落，需挑取单个菌落进行进一步鉴定（如生化试验、血清学试验），排除假阳性。

 

五、注意事项

 

安全性：煌绿有一定刺激性，操作时避免接触皮肤和黏膜；废弃培养基需高压灭菌后再处理。

 

质量控制：每次使用前可通过质控菌株验证培养基有效性（如鼠伤寒沙门氏菌应生长良好，大肠杆菌应被部分抑制且菌落呈黄色）。

 

局限性：伤寒沙门氏菌可能被煌绿抑制，若需检测伤寒沙门氏菌，需搭配其他培养基（如 SS 琼脂）。

 

通过以上步骤，可有效利用酚红煌绿琼脂培养基分离沙门氏菌，结合后续鉴定试验，实现对目标菌的准确检测。

 

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