兔原代胎盘绒毛膜滋养层细胞的分离与培养要点及应用方向！

 

兔原代胎盘绒毛膜滋养层细胞是从兔子胎盘绒毛膜组织中分离得到的原代细胞（即直接从活体组织分离、未经过传代培养的细胞），属于胎盘功能核心细胞之一。这类细胞在兔的妊娠过程中承担关键作用，同时也是生殖生物学、胚胎发育及相关疾病研究的重要实验材料。以下从基本特性、分离培养要点、生物学功能及应用方向展开说明：

 

一、基本特性

 

1、组织来源

 

来源于兔胎盘绒毛膜外层的滋养层（Trophoblast），是胎盘与母体子宫内膜接触的关键细胞层，直接参与母体 - 胎儿间的物质交换、免疫耐受及妊娠维持。

 

2、形态与表型

 

原代状态下多呈上皮样形态（多边形或不规则扁平状），贴壁生长；表达滋养层细胞特异性标志物，如细胞角蛋白 7（CK7）、胎盘催乳素（PL）、人绒毛膜促性腺激素类似物（rCG，兔源）等，可通过免疫荧光鉴定。

 

3、功能特性

 

保留了体内核心功能：

 

物质转运：通过细胞膜载体或被动扩散，转运营养物质（如氨基酸、葡萄糖）和氧气至胎儿，排出代谢废物；

 

激素分泌：分泌孕酮、胎盘催乳素等激素，维持妊娠黄体功能及母体妊娠状态；

 

侵袭能力：早期可适度侵袭母体子宫内膜，建立胎盘与母体的连接（但兔滋养层侵袭性弱于人类，物种差异需注意）。

 

二、分离与培养要点

 

由于原代细胞对环境敏感，分离和培养需严格控制操作，核心步骤及注意事项如下：

 

1、组织获取与预处理

 

选择妊娠中期兔胎盘（如兔妊娠 14-20 天，此时绒毛膜滋养层细胞增殖活跃，易于分离）；

 

无菌条件下剥离胎盘绒毛膜组织，用 PBS（含双抗）反复清洗，去除血液及杂质，剪碎至 1-2mm³ 小块。

 

2、细胞分离方法

 

常用酶消化法：

 

用 0.25% 胰蛋白酶 - EDTA 或胶原酶 （浓度 0.1-0.2%）在 37下消化 30-60 分钟（根据组织块硬度调整），期间轻柔震荡；

 

消化后用含血清的培养基终止反应，过 200 目筛网去除未消化组织块，离心收集细胞（1000rpm，5 分钟）。

 

3、培养条件

 

培养基：常用 DMEM/F12（含 10-15% 胎牛血清），添加青霉素 - 链霉素（防污染）、L - 谷氨酰胺（维持细胞代谢）；

 

环境：37、5% CO恒温培养箱，湿度 95%；

 

传代：原代细胞贴壁后（约 24-48 小时）换液，长满至 70-80% 时用胰酶消化传代（一般可传 2-3 代，传代后功能易衰减，需尽快使用）。

 

4、纯度鉴定

 

通过检测滋养层特异性标志物（如波形蛋白阴性，排除间充质细胞污染），确保细胞纯度＞90%。

 

三、主要应用方向

 

兔原代胎盘绒毛膜滋养层细胞因与人类胎盘滋养层细胞有部分功能同源性（同时物种易获取、伦理限制低），被广泛用于以下研究：

 

1、妊娠生理机制研究

 

模拟母体 - 胎儿物质交换过程（如营养转运效率与激素调控的关系）；

 

探究滋养层细胞增殖、分化对胎盘发育的影响（如兔妊娠中晚期胎盘功能衰退的细胞机制）。

 

2、药物安全性评价

 

测试孕期药物对滋养层细胞功能的影响（如是否抑制激素分泌、损伤物质转运能力）；

 

评估环境污染物（如重金属、塑化剂）对胎盘细胞的毒性作用。

 

3、相关疾病模型构建

 

模拟“妊娠并发症”（如兔滋养层细胞侵袭不足导致的胎盘发育不良），探索发病机制；

 

筛选改善滋养层功能的候选药物（如促进侵袭或激素分泌的小分子）。

 

4、比较医学研究

 

对比兔与人类滋养层细胞的差异（如侵袭能力、激素分泌谱），为人类胎盘研究提供动物实验参考（需注意物种特异性，避免直接外推结论）。

 

四、注意事项

 

物种差异：兔滋养层细胞的侵袭性、激素分泌类型与人类存在差异（如人类滋养层分泌 hCG，兔分泌 rCG 且功能有别），实验结论需结合物种特性解读。

 

原代细胞局限性：体外存活时间短（传代次数少）、个体差异可能影响实验重复性，需严格控制兔的品系、妊娠时间及分离操作一致性。

 

无菌要求：胎盘组织易携带微生物，分离及培养全程需在超净工作台操作，定期检测细胞污染（如真菌、支原体）。

 

总之，兔原代胎盘绒毛膜滋养层细胞是研究胎盘功能、妊娠生理及药物安全性的重要工具，其核心价值在于“保留体内细胞特性”，但需结合实验目标合理设计分离、培养及检测方案。

 

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