微生物实验检测中无菌取样的核心原则及操作规范与要点！

 

百欧博伟生物：“无菌取样”是指在获取样品（如微生物检测样品、无菌产品、细胞培养物等）的过程中，严格防止任何外来微生物污染样品的操作方法和过程。其核心目标是确保所取样品能够真实反映其原始状态下的微生物状况（无论是有菌还是无菌），避免因取样操作本身引入污染而导致错误的检测结果或产品污染。

 

一、无菌取样的核心原则：

 

1、防止污染：这是最根本的原则。所有操作都要围绕避免环境中、操作者身上或取样工具上的微生物进入样品。

 

2、使用无菌器具：所有直接接触样品的工具（如注射器、针头、镊子、剪刀、取样勺、拭子、培养皿、试管、容器等）必须经过有效的灭菌处理（如高压蒸汽灭菌、干热灭菌、环氧乙烷灭菌或无菌一次性使用），并在使用前保持其无菌状态。

 

3、无菌环境/区域：取样应在尽可能洁净的环境中进行。理想情况下应在专门的洁净室、生物安全柜或超净工作台内操作。如果在现场或非受控环境取样，需采取额外防护措施（如使用火焰屏障、无菌罩等）。

 

4、操作者无菌操作：

 

操作人员需穿戴干净的工作服（最好是无菌服）、口罩、帽子。

 

操作前必须严格、规范地洗手和消毒（通常使用70-75%酒精或专用消毒剂）。

 

操作时需佩戴无菌手套，并在整个关键操作过程中保持手套的无菌性（避免触碰非无菌表面）。

 

动作要准确、迅速、轻柔，减少空气流动和产生气溶胶。

 

避免对着样品说话、咳嗽或打喷嚏。

 

5、无菌技术：

 

火焰灭菌：在无菌区域外操作时，常使用酒精灯或本生灯对工具（如镊子、剪刀、容器口）进行火焰灭菌。

 

避免交叉污染：无菌器具只能接触无菌物品或样品本身，接触后即视为有污染风险，不可再直接接触其他无菌物品。

 

最小化暴露：无菌容器仅在需要放入样品时才打开，打开后应尽量保持容器口向下或处于保护状态（如在火焰附近），并尽快关闭。

 

无菌转移：样品从一个无菌容器转移到另一个时，需确保转移路径和工具的无菌性。

 

二、无菌取样的关键步骤：

 

1、准备：

 

明确取样目的、样品类型和所需体积/数量。

 

准备并确认所有所需无菌器具、容器、运输介质（如适用）均已灭菌且在有效期内。

 

穿戴好个人防护装备（PPE），并进行手部消毒。

 

准备好消毒剂用于样品接触点的消毒。

 

设定好无菌工作区域（如开启超净台/生物安全柜并运行足够时间）。

 

2、取样点消毒（如适用）：对于需要从特定表面或开口（如瓶口、罐口、管道接口、皮肤穿刺点）取样的，必须先用合适的消毒剂对接触点进行彻底消毒，并等待其完全干燥，以避免消毒剂残留抑制微生物或污染样品。

 

3、取样操作：

 

在无菌区域（如超净台内）或严格遵守无菌操作规范进行。

 

打开无菌容器或包装时，注意手法，避免手或非无菌物品接触内部或边缘。

 

使用无菌工具（镊子、注射器、拭子等）获取样品。

 

操作迅速、准确，避免工具或样品在空气中暴露过久。

 

避免手部或非无菌物体越过打开的容器或样品上方。

 

取样工具只能接触样品一次，如需再次取样，应更换新工具。

 

4、样品封装：

 

将取得的样品立即、小心地放入无菌容器中。

 

确保容器密封良好，防止泄漏和后续污染。

 

在容器上清晰、准确地标记样品信息（如样品编号、名称、取样日期时间、取样人、取样位置等）。

 

5、运输与储存：

 

根据样品特性和检测要求，在规定的条件下（如冷藏、冷冻、常温避光）及时运输到实验室。

 

使用合适的运输容器（如保温箱+冰袋），确保运输过程不会破坏样品的无菌状态或影响目标微生物的存活。

 

6、记录：

 

详细记录取样过程，包括取样时间、地点、方法、使用的器具、消毒方法、操作人员、环境条件（如洁净度级别）、样品标识、运输条件等。这对于结果追溯和质量控制至关重要。

 

三、应用场景举例：

 

医疗：采集血液、脑脊液、尿液、脓液、组织活检样本用于微生物培养。

 

制药：在生产过程中或最终产品中取样进行无菌检查、微生物限度检查、内毒素检测。

 

生物制品/细胞治疗：细胞培养物的传代、冻存或检测取样。

 

食品与饮料：原料、生产线（设备表面、中间产品、水、空气）、成品的微生物检测取样。

 

化妆品：成品或原料的微生物检测取样。

 

环境监测：洁净室/区的空气、表面、人员（接触碟）的微生物监测取样。

 

科研：无菌动物实验、无菌培养基配制、分子生物学实验（避免DNA酶/RNA酶污染也类似无菌概念）。

 

四、总结：

 

无菌取样是一项需要高度严谨性、规范操作和丰富经验的技术。它要求操作者深刻理解无菌概念，熟练掌握无菌操作技术，并在每个细节上都严格遵守规程。任何环节的疏忽都可能导致取样失败，得到不可靠的结果，甚至造成严重后果。因此，接受专业培训、遵循标准操作规程（SOP）并进行充分的实践是保证无菌取样成功的关键。

 

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