无菌室灭菌操作的准备工作及灭菌方法的选择与执行注意事项！

 

百欧博伟生物：无菌室的灭菌是维持其洁净度和防止污染的关键环节。以下是需要特别注意的关键事项：

 

一、灭菌前的准备工作

 

1、彻底清洁：

 

先清洁后灭菌：这是最基本原则。任何灰尘、污垢、有机物残留都会大大降低灭菌剂的效果，形成保护层阻碍灭菌剂接触微生物。

 

清洁范围：包括所有表面（墙面、地面、天花板、工作台面）、设备外表面、椅子、门把手、传递窗、空调出风口格栅等。特别注意角落、缝隙和难以触及的地方。

 

清洁工具：使用专用的、不易掉纤维的无尘抹布、拖把和清洁桶。清洁工具本身必须保持洁净，最好在无菌室专用或经过严格消毒。

 

清洁剂：使用合适的清洁剂（如无残留的表面活性剂溶液），彻底清除油污、指纹等有机污染物。清洁后需用无菌水或无尘布擦拭干净，去除清洁剂残留。

 

2、移除不必要的物品：

 

将非必需的设备、耗材、记录本、个人物品等移出无菌室或放入密闭的柜子内。只保留本次操作或灭菌后立即使用的必要物品。

 

3、设备准备：

 

确保所有需要使用的灭菌设备（如甲醛发生器、臭氧发生器、VHP发生器、喷雾器、紫外灯）状态良好，经过校准，并在有效期内。

 

检查并更换高效空气过滤器的预过滤器（如果可更换）。

 

确保空调净化系统正常运行。

 

4、人员准备：

 

操作人员需经过严格培训，熟悉灭菌流程、设备操作和安全防护措施。

 

穿戴适当的个人防护装备（如防护服、口罩、手套、护目镜或面罩，特别是使用化学熏蒸剂时）。

 

二、灭菌方法的选择与执行注意事项

 

1、化学熏蒸法（甲醛、过氧化氢蒸汽VHP、臭氧等）：

 

密封性检查：灭菌前必须严格检查无菌室的密封性（门缝、传递窗、管线穿孔等），确保气体不会泄漏。必要时使用密封胶带。

 

湿度控制：某些方法对湿度有要求，需提前调节室内湿度至适宜范围。

 

浓度与时间：严格按照操作规程，确保灭菌剂达到并维持足够的浓度和作用时间。使用经过校准的浓度监测设备。

 

均匀分布：确保气体/蒸汽能在整个空间内均匀分布，避免死角。可能需要使用风扇辅助循环（注意风扇本身不能成为污染源）。

 

安全第一：这是最危险的环节！操作人员必须佩戴合适的呼吸防护装备，设置警戒标识，防止他人误入。确保有良好的通风排毒系统。

 

中和与排放：灭菌结束后，必须按照安全规程进行彻底的中和和强制排风，将残留气体浓度降至安全限值以下（通常需要在线监测或使用检测管确认）。未经验证安全，绝对禁止人员进入！

 

2、液体消毒剂擦拭法：

 

消毒剂选择：选择广谱、高效、低腐蚀性、低残留且与无菌室材料兼容的消毒剂（如稀释的过氧化氢、季铵盐类、酚类等）。注意轮换使用不同类型的消毒剂以防止微生物产生耐药性。

 

浓度有效性：确保使用正确浓度的消毒液，并注意其有效期。现用现配效果更佳。

 

擦拭技巧：采用“S”形或重叠擦拭法，避免遗漏区域。保持擦拭巾湿润，但不要滴液。遵循“从洁净区到较脏区”，“从上到下”的原则。

 

接触时间：消毒剂必须与被消毒表面保持足够的湿润接触时间（通常几分钟，具体看产品说明），才能有效杀灭微生物。不可刚擦上就马上擦干。

 

擦拭巾管理：使用无菌、不脱落纤维的无尘布。一块布擦一个区域或一面，及时更换，避免交叉污染。不要将用过的布放回消毒液容器中。

 

3、紫外线照射法：

 

局限性认知：紫外线（UV-C）只能作为辅助灭菌手段，不能单独用于空间灭菌。它穿透力弱，存在照射阴影区（如物体背面、下层），且对芽孢杀灭效果有限。

 

表面清洁：照射前表面必须清洁干净，灰尘和污垢会阻挡紫外线。

 

照射距离与时间：确保足够的照射强度和照射时间（通常需要数小时）。灯管与被照射表面的距离不宜过远（通常1-1.5米内有效）。

 

灯管维护：定期清洁灯管表面灰尘（影响强度），并监测灯管强度（使用UV强度计），及时更换老化灯管（通常寿命1000-3000小时）。

 

人员安全：紫外线对人眼和皮肤有害。必须在人员撤离后开启，并在人员进入前关闭。

 

三、灭菌后的维持与管理

 

1、验证灭菌效果：

 

生物指示剂：这是验证空间灭菌效果的金标准。在灭菌前将含有高抗性微生物（如嗜热脂肪地芽孢杆菌芽孢或枯草芽孢杆菌黑色变种芽孢）的生物指示剂放置在灭菌舱室内的不同位置（特别是最难灭菌的位置和角落）。灭菌后取出培养，确认无菌生长。

 

化学指示剂：可辅助判断灭菌过程是否达到某些物理条件（如温度、湿度、气体浓度），但不能直接证明微生物被杀灭。

 

环境监测：灭菌后，按照计划进行沉降菌、浮游菌、表面微生物等的监测，确认环境达到所需洁净度级别。

 

2、防止再污染：

 

人员进出控制：严格执行人员进出程序（更衣、风淋、消毒）。

 

物料进出控制：所有进入无菌室的物料必须经过严格的清洁和灭菌（如通过传递窗的消毒、擦拭或VHP灭菌），并记录。

 

行为规范：室内人员动作应轻缓、减少不必要的活动和交谈，避免产生大量微粒和气溶胶。

 

设备维护：定期维护空调净化系统（包括高效过滤器的完整性测试和更换）、灭菌设备等。

 

持续清洁消毒：每次操作前后对工作区域进行局部清洁消毒。定期进行全面的清洁和空间灭菌（频率根据使用情况和监测结果确定）。

 

四、记录与文件

 

详细记录：每一次灭菌操作都必须详细记录，包括：

 

灭菌日期、时间、操作人员

 

使用的灭菌方法、设备编号

 

关键参数（如气体浓度、温度、湿度、作用时间、消毒剂名称/浓度/批号）

 

生物指示剂/化学指示剂的放置位置、品牌、批号、结果

 

灭菌效果验证结果（生物指示剂培养结果）

 

排毒结束时间和确认安全的记录

 

任何异常情况及处理措施

 

文件保存：这些记录是质量体系的重要组成部分，必须妥善保存，便于追溯和审计。

 

总结关键点：

 

清洁是灭菌的前提和基础。

 

选择合适的灭菌方法并严格遵守操作规程。

 

化学熏蒸安全第一！密封、防护、中和、排毒、验证缺一不可。

 

擦拭消毒要保证浓度、接触时间和覆盖全面。

 

紫外线仅作辅助，不能替代。

 

灭菌效果必须通过生物指示剂验证。

 

灭菌后维持无菌状态依赖于严格的日常管理和人员规范。

 

完整准确的记录至关重要。

 

严格遵循这些注意事项，才能确保无菌室灭菌的有效性和可靠性，为关键的无菌操作提供保障。

 

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