细菌荚膜染色技术的原理与方法及注意事项与应用场景！

 

百欧博伟生物：细菌荚膜染色是一种特殊的微生物学染色技术，用于观察细菌细胞外层的荚膜（由多糖或多肽组成的粘液层）。由于荚膜不易着色且亲水性强，常规染色法（如革兰氏染色）无法使其显色，因此需采用负染色法（背景染色法） 来凸显其透明结构。

 

一、染色原理

 

1、负染色原理：

 

使用深色染料（如印度墨汁、苯胺黑、台盼蓝）将背景染成深色。

 

荚膜本身不着色，在深色背景下呈现为菌体周围的透明亮圈。

 

菌体则通过简单染色（如结晶紫、沙黄）着色，形成对比。

 

2、荚膜特性：

 

荚膜由水溶性多糖组成，染料无法渗透或结合。

 

常规加热固定会破坏荚膜结构，因此染色过程需避免加热。

 

二、常用方法

 

1、印度墨汁法（湿墨水法）

 

步骤：

 

载玻片上加1滴印度墨汁。

 

将细菌培养物（或菌落）与墨汁混合均匀。

 

盖上盖玻片，轻压使混合液成薄层。

 

直接油镜观察：菌体深色，背景黑色，荚膜为透明晕圈。

 

2、改良Anthony荚膜染色法（干法）

 

步骤：

 

制涂片：菌悬液涂于载玻片，自然风干（不可加热固定）。

 

染菌体：滴加1%结晶紫染5–7分钟。

 

冲洗：用20%硫酸铜溶液轻轻冲洗染液（不可用水冲，避免荚膜溶解）。

 

吸干、油镜观察：菌体紫色，背景淡蓝色，荚膜为无色透明圈。

 

3、苯胺黑负染色法

 

步骤：

 

载玻片一端加1滴5%苯胺黑水溶液。

 

取少量菌苔与染料混匀，推成薄涂片。

 

自然风干后油镜观察：背景灰黑，菌体灰白，荚膜透明。

 

三、关键注意事项

 

避免加热固定：高温会使荚膜收缩或破坏。

 

不可水洗：水会溶解荚膜多糖，导致结构消失。

 

菌量控制：菌苔过厚会导致背景杂乱，难以观察。

 

染色时间：负染色需快速操作，避免干燥过程中荚膜变形。

 

四、应用场景

 

病原菌鉴定：如肺炎链球菌（荚膜为毒力因子）、炭疽芽孢杆菌。

 

工业菌株筛选：产荚膜菌株可用于生产多糖（如黄原胶）。

 

生物膜研究：观察细菌在表面的粘附结构。

 

五、结果示例

 

组分      颜色表现

 

细菌细胞  紫色/蓝色（取决于染色剂）

 

荚膜      无色透明圈（包围菌体）

 

背景      黑色/深灰色（负染色剂）

 

常见错误：误将未染色的细胞碎片或气泡当作荚膜。需结合菌体形态综合判断。

 

掌握荚膜染色技术对理解细菌的致病机制及环境适应性至关重要。

 

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