微生物检测中几种最常用且重要的细菌接种方法!
(2025-08-20 15:17:39)
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分类: 微生物菌种 |
百欧博伟生物:在微生物检测中,细菌接种是将待测样本(或纯培养物)转移到适宜的培养基上或培养基中的过程,目的是让细菌生长繁殖,以便进行分离、纯化、计数、鉴定或特性研究。以下是几种最常用且重要的细菌接种方法:
一、平板划线法
目的:分离混合样本中的单个细菌,获得单个、孤立的菌落,以便进行纯培养和鉴定。
方法:
用无菌接种环沾取少量样本(菌液或待分离物)。
在固体平板培养基表面进行划线。有多种划线方式:
分区划线法:最常用。将平板分成4个区域。先在第一个区域密集划几道线(约占1/4面积),灼烧接种环冷却后,从第一区末端划出几条线进入第二区(约占1/4面积),再次灼烧冷却,从第二区末端划入第三区,最后划入第四区。样本中的细菌随着划线被逐渐稀释,在第四区通常能长出单个菌落。
连续划线法:从平板一边开始,连续地、紧密地呈“之”字形划线覆盖整个平板表面。适用于样本中细菌数量较少或需要大量分离的情况。
放射划线法:从平板中心开始,向四周放射状划线。也用于分离。
工具:主要使用接种环。
关键点:无菌操作,分区划线时每划完一个区必须灼烧接种环并冷却,划线力度适中避免划破琼脂。
二、倾注平板法
目的:主要用于菌落计数(如水质、食品、药品的细菌总数测定)。
方法:
取一定量(通常1mL)的稀释样本(或原液)加入无菌培养皿中。
将融化并冷却至约45-50°C(不烫手)的琼脂培养基倾注到培养皿中。
立即盖上皿盖,轻轻但充分地水平旋转培养皿,使样本与培养基混合均匀。
待琼脂完全凝固后,倒置培养。
结果:细菌在培养基内部和表面生长,形成菌落。通过计数菌落数乘以稀释倍数来计算样本中的活菌总数。
优势:能计数厌氧菌和兼性厌氧菌。适合含菌量较高的样本。
缺点:菌落可能重叠或在深层生长不易观察;需要融化并冷却培养基,操作步骤稍多。
三、涂布平板法
目的:也主要用于菌落计数,特别适用于严格好氧菌的计数或需要表面菌落形态观察的情况。
方法:
先将灭菌的固体琼脂培养基倾注入培养皿中,待其完全凝固并干燥表面水分。
取一定量(通常0.1mL或0.2mL)的稀释样本滴加在平板中央。
用无菌的涂布棒(L形玻璃棒或一次性塑料涂布棒)在琼脂表面均匀地涂布开。涂布棒需先用酒精浸泡并灼烧灭菌,冷却后使用。
待接种液被琼脂吸收后(可将平板正置放置片刻),倒置培养。
结果:细菌仅在培养基表面生长,形成菌落。
优势:菌落都在表面,形态清晰易观察计数。适合好氧菌计数。
缺点:对操作技术要求稍高(涂布均匀),加入的样本量较小(通常≤0.2mL),可能导致误差;深层厌氧菌不易生长。
四、液体接种法
目的:增菌培养(使少量细菌快速大量繁殖)、进行生化试验(接种于各种液体生化管)、保存菌种(如肉汤管)、制备菌悬液等。
方法:
用无菌接种环或无菌吸管/移液器吸取样本或纯培养物。
将样本转移至装有液体培养基(如肉汤、蛋白胨水、各种糖发酵管等)的试管或烧瓶中。
在接近液面处的管壁轻轻研磨接种环,或直接将吸管中的液体吹打入培养基中。
盖好盖子或塞好棉塞/硅胶塞,轻轻振荡混匀。
关键点:无菌操作,避免接种环接触管口;混匀很重要。
五、穿刺接种法
目的:
观察细菌的动力(运动性):能运动的细菌会从穿刺线向外扩散生长,呈云雾状或羽毛状;不运动的细菌只沿穿刺线生长。
保藏菌种(特别是半固体培养基)。
进行某些生化试验。
方法:
使用接种针(直针),沾取少量菌落或菌苔。
垂直刺入装有半固体琼脂培养基(或特定生化试验培养基)的试管中心,刺入深度约为试管高度的2/3到3/4。
沿原穿刺路径小心退出接种针。
关键点:穿刺线要直且位于培养基中央,退出时避免晃动导致穿刺线不规则。
六、斜面接种法
目的:扩大培养以获得大量菌体(用于生化试验、抗原制备等)、短期保藏菌种、观察菌苔特征。
方法:
用无菌接种环沾取菌落或菌液。
在琼脂斜面培养基表面,从底部开始向上划一条连续的“之”字形直线(蛇形划线)。
或先在斜面底部划一条直线,再在其上作蜿蜒划线。
结果:细菌在斜面上生长形成一层菌苔。
七、点接种法
目的:快速接种多个点(如进行多点药敏试验初筛、快速观察多个菌落在特定培养基上的生长情况)。
方法:用无菌接种针或细接种环沾取少量菌,垂直点在固体平板或斜面的特定位置上。
特点:操作快速,节省空间。
八、其他方法:
螺旋平板法:一种自动化的定量接种方法,通过螺旋形的机械装置将样本连续稀释地涂布在平板上,便于菌落计数器的自动计数。
玻片培养法:用于观察真菌或放线菌的微观形态,较少用于常规细菌检测。
滤膜法:先让样本通过滤膜(如0.45μm或0.22μm微孔滤膜)截留细菌,再将滤膜贴于固体培养基表面进行培养计数,适用于含菌量低的液体样本(如水样)。
九、选择接种方法的依据:
检测目的:分离纯化(划线)、计数(倾注/涂布)、增菌(液体)、动力观察(穿刺)、生化试验(液体/斜面/穿刺)、保种(斜面/半固体穿刺)。
样本类型和含菌量:高浓度(需稀释后倾注/涂布)、低浓度(需增菌或滤膜法)。
目标细菌的特性:好氧(涂布)、厌氧(倾注/特殊培养)、运动性(穿刺)。
培养基类型:固体平板、斜面、半固体、液体。
熟练掌握这些接种方法并严格遵守无菌操作规程,是保证微生物检测结果准确可靠的基础。每种方法都有其特定的应用场景和优缺点,需要根据具体实验目的灵活选择。
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