微生物检测中几种最常用且重要的细菌接种方法！

 

百欧博伟生物：在微生物检测中，细菌接种是将待测样本（或纯培养物）转移到适宜的培养基上或培养基中的过程，目的是让细菌生长繁殖，以便进行分离、纯化、计数、鉴定或特性研究。以下是几种最常用且重要的细菌接种方法：

 

一、平板划线法

 

目的：分离混合样本中的单个细菌，获得单个、孤立的菌落，以便进行纯培养和鉴定。

 

方法：

 

用无菌接种环沾取少量样本（菌液或待分离物）。

 

在固体平板培养基表面进行划线。有多种划线方式：

 

分区划线法：最常用。将平板分成4个区域。先在第一个区域密集划几道线（约占1/4面积），灼烧接种环冷却后，从第一区末端划出几条线进入第二区（约占1/4面积），再次灼烧冷却，从第二区末端划入第三区，最后划入第四区。样本中的细菌随着划线被逐渐稀释，在第四区通常能长出单个菌落。

 

连续划线法：从平板一边开始，连续地、紧密地呈“之”字形划线覆盖整个平板表面。适用于样本中细菌数量较少或需要大量分离的情况。

 

放射划线法：从平板中心开始，向四周放射状划线。也用于分离。

 

工具：主要使用接种环。

 

关键点：无菌操作，分区划线时每划完一个区必须灼烧接种环并冷却，划线力度适中避免划破琼脂。

 

二、倾注平板法

 

目的：主要用于菌落计数（如水质、食品、药品的细菌总数测定）。

 

方法：

 

取一定量（通常1mL）的稀释样本（或原液）加入无菌培养皿中。

 

将融化并冷却至约45-50°C（不烫手）的琼脂培养基倾注到培养皿中。

 

立即盖上皿盖，轻轻但充分地水平旋转培养皿，使样本与培养基混合均匀。

 

待琼脂完全凝固后，倒置培养。

 

结果：细菌在培养基内部和表面生长，形成菌落。通过计数菌落数乘以稀释倍数来计算样本中的活菌总数。

 

优势：能计数厌氧菌和兼性厌氧菌。适合含菌量较高的样本。

 

缺点：菌落可能重叠或在深层生长不易观察；需要融化并冷却培养基，操作步骤稍多。

 

三、涂布平板法

 

目的：也主要用于菌落计数，特别适用于严格好氧菌的计数或需要表面菌落形态观察的情况。

 

方法：

 

先将灭菌的固体琼脂培养基倾注入培养皿中，待其完全凝固并干燥表面水分。

 

取一定量（通常0.1mL或0.2mL）的稀释样本滴加在平板中央。

 

用无菌的涂布棒（L形玻璃棒或一次性塑料涂布棒）在琼脂表面均匀地涂布开。涂布棒需先用酒精浸泡并灼烧灭菌，冷却后使用。

 

待接种液被琼脂吸收后（可将平板正置放置片刻），倒置培养。

 

结果：细菌仅在培养基表面生长，形成菌落。

 

优势：菌落都在表面，形态清晰易观察计数。适合好氧菌计数。

 

缺点：对操作技术要求稍高（涂布均匀），加入的样本量较小（通常≤0.2mL），可能导致误差；深层厌氧菌不易生长。

 

四、液体接种法

 

目的：增菌培养（使少量细菌快速大量繁殖）、进行生化试验（接种于各种液体生化管）、保存菌种（如肉汤管）、制备菌悬液等。

 

方法：

 

用无菌接种环或无菌吸管/移液器吸取样本或纯培养物。

 

将样本转移至装有液体培养基（如肉汤、蛋白胨水、各种糖发酵管等）的试管或烧瓶中。

 

在接近液面处的管壁轻轻研磨接种环，或直接将吸管中的液体吹打入培养基中。

 

盖好盖子或塞好棉塞/硅胶塞，轻轻振荡混匀。

 

关键点：无菌操作，避免接种环接触管口；混匀很重要。

 

五、穿刺接种法

 

目的：

 

观察细菌的动力（运动性）：能运动的细菌会从穿刺线向外扩散生长，呈云雾状或羽毛状；不运动的细菌只沿穿刺线生长。

 

保藏菌种（特别是半固体培养基）。

 

进行某些生化试验。

 

方法：

 

使用接种针（直针），沾取少量菌落或菌苔。

 

垂直刺入装有半固体琼脂培养基（或特定生化试验培养基）的试管中心，刺入深度约为试管高度的2/3到3/4。

 

沿原穿刺路径小心退出接种针。

 

关键点：穿刺线要直且位于培养基中央，退出时避免晃动导致穿刺线不规则。

 

六、斜面接种法

 

目的：扩大培养以获得大量菌体（用于生化试验、抗原制备等）、短期保藏菌种、观察菌苔特征。

 

方法：

 

用无菌接种环沾取菌落或菌液。

 

在琼脂斜面培养基表面，从底部开始向上划一条连续的“之”字形直线（蛇形划线）。

 

或先在斜面底部划一条直线，再在其上作蜿蜒划线。

 

结果：细菌在斜面上生长形成一层菌苔。

 

七、点接种法

 

目的：快速接种多个点（如进行多点药敏试验初筛、快速观察多个菌落在特定培养基上的生长情况）。

 

方法：用无菌接种针或细接种环沾取少量菌，垂直点在固体平板或斜面的特定位置上。

 

特点：操作快速，节省空间。

 

八、其他方法：

 

螺旋平板法：一种自动化的定量接种方法，通过螺旋形的机械装置将样本连续稀释地涂布在平板上，便于菌落计数器的自动计数。

 

玻片培养法：用于观察真菌或放线菌的微观形态，较少用于常规细菌检测。

 

滤膜法：先让样本通过滤膜（如0.45μm或0.22μm微孔滤膜）截留细菌，再将滤膜贴于固体培养基表面进行培养计数，适用于含菌量低的液体样本（如水样）。

 

九、选择接种方法的依据：

 

检测目的：分离纯化（划线）、计数（倾注/涂布）、增菌（液体）、动力观察（穿刺）、生化试验（液体/斜面/穿刺）、保种（斜面/半固体穿刺）。

 

样本类型和含菌量：高浓度（需稀释后倾注/涂布）、低浓度（需增菌或滤膜法）。

 

目标细菌的特性：好氧（涂布）、厌氧（倾注/特殊培养）、运动性（穿刺）。

 

培养基类型：固体平板、斜面、半固体、液体。

 

熟练掌握这些接种方法并严格遵守无菌操作规程，是保证微生物检测结果准确可靠的基础。每种方法都有其特定的应用场景和优缺点，需要根据具体实验目的灵活选择。

 

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