营养琼脂（Nutrient Agar）的原理与使用方法及应用！

 

营养琼脂是一种基础微生物培养基，广泛用于非苛养菌的培养、菌落计数或保存菌种。以下是其原理及使用方法的详细说明：

 

一、原理

 

营养琼脂通过提供细菌生长所需的基本营养成分和环境条件支持微生物增殖，主要成分及作用如下：

 

蛋白胨：提供氮源、氨基酸和短肽链。

 

牛肉浸粉/酵母提取物：补充碳源、维生素（如B族）和微量元素。

 

氯化钠（NaCl）：维持渗透压平衡，模拟细菌生长的生理环境。

 

琼脂（约1.5%）：作为凝固剂，形成固体培养基便于菌落观察。

 

适用对象：大肠杆菌、金黄色葡萄球菌等普通细菌，不适用于苛养菌（如嗜血杆菌）或专性厌氧菌。

 

二、使用方法

 

1、培养基配制

 

配方（以1L为例）：

 

蛋白胨：5g

 

牛肉浸粉：3g

 

NaCl：5g

 

琼脂：15g

 

蒸馏水：1000mL

 

步骤：

 

a.称取各成分，加入蒸馏水中搅拌溶解。

 

b.加热煮沸至琼脂完全融化（避免焦糊）。

 

c.高压灭菌：121、15-20分钟。

 

d.冷却至约50后倾注无菌平皿或分装试管（制备斜面）。

 

2、接种与培养

 

接种方法：划线法、涂布法或穿刺法（依实验目的选择）。

 

培养条件：35-37恒温培养18-24小时，观察菌落形态。

 

3、结果判读

 

阳性：培养基表面出现菌落（可能为圆形、湿润、颜色各异）。

 

阴性：无菌落生长（可能因样本无微生物或培养条件不当）。

 

三、注意事项

 

灭菌控制：避免高温长时间灭菌，以防碳源焦化。

 

无菌操作：倾倒培养基需在超净台中进行，避免污染。

 

储存：灭菌后未使用的培养基可冷藏保存1-2周，凝固后避免反复融化。

 

质控：定期用标准菌株（如大肠杆菌ATCC 25922）验证培养基有效性。

 

局限性：苛养菌、真菌或病毒需使用专用培养基。

 

四、应用场景

 

临床标本（如痰液、尿液）的初步细菌培养。

 

食品、环境样本的卫生检测（如菌落总数测定）。

 

实验室菌种传代保藏。

 

通过以上步骤，营养琼脂可高效支持常规微生物的分离与培养。若需特殊菌种筛选，建议选择选择性或鉴别性培养基。

 

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