血琼脂培养基的选用与平板制作指南及常见问题与解决！

 

血琼脂培养基是一种常用的营养培养基，广泛应用于临床和实验室中苛养菌（如链球菌、肺炎球菌等）的分离培养及溶血特性观察。以下是其选用和平板制作的注意事项：

 

一、基础培养基的选用

 

1、常用基础类型

 

营养琼脂（Nutrient Agar）：通用型基础，适合大多数细菌培养，但营养相对简单。

 

哥伦比亚琼脂（Columbia Agar）：含更多营养成分（如酵母提取物、酪蛋白水解物），适合苛养菌（如厌氧菌或链球菌）。

 

脑心浸液琼脂（BHI Agar）：营养丰富，适合对营养要求高的细菌（如肺炎链球菌）。

 

2、选择依据

 

目标菌种：苛养菌需选择营养更丰富的基底（如哥伦比亚琼脂）。

 

检测目的：若需观察溶血现象，需选择透明度高的基础（如胰蛋白胨大豆琼脂）。

 

添加剂需求：某些菌（如嗜血杆菌）需额外添加NAD（辅酶）或血红素。

 

二、血源的选用

 

1、血源类型

 

脱纤维羊血：最常用，β-溶血反应清晰（如A群链球菌）。

 

兔血或马血：某些菌（如副溶血弧菌）可能需要特定血源。

 

人血：避免使用（可能存在抗体或病原体污染）。

 

2、浓度

 

通常添加5%~10%（v/v）的血液，常用5%。

 

高浓度（如10%）可能抑制某些细菌（如流感嗜血杆菌）。

 

三、平板制作注意事项

 

1、无菌操作

 

基础培养基需高压灭菌（121, 15分钟），避免直接高温加热已加血的培养基。

 

血液需无菌采集，添加时保持无菌环境。

 

2、温度控制

 

基础培养基冷却至45~50时加入血液，温度过高会导致红细胞破裂（假性溶血），过低易凝固。

 

混合时轻柔旋转混匀，避免振荡产生气泡或溶血。

 

3、倒板与保存

 

厚度：3~4 mm（约20~25 mL/90 mm平板），过薄易干燥，过厚影响氧气渗透。

 

避免气泡：倾倒后轻晃平板使表面平整，或火焰短暂灼烧表面去除气泡。

 

保存：现配现用，或密封后2~8保存≤1周（长时间冷藏可能导致血液成分降解）。

 

4、质量控制

 

每批新血需用标准菌株（如金黄色葡萄球菌、化脓性链球菌）验证溶血效果。

 

观察是否有溶血、污染或异常沉淀。

 

四、特殊要求

 

1、厌氧菌培养

 

需预还原处理或在厌氧环境中制备。

 

2、选择性培养基

 

若需抑制杂菌，可添加抗生素（如万古霉素）或染料（如结晶紫）。

 

3、CO培养

 

某些细菌（如肺炎链球菌）需5%~10% CO环境，可选用含碳酸氢钠的缓冲系统。

 

五、常见问题与解决

 

溶血不清晰：检查血源是否失效、温度是否过高，或基础培养基透明度不足。

 

污染：严格无菌操作，确保血源和基础培养基无菌。

 

干裂或冷凝水过多：倒板后充分凝固，避免叠放或温度骤变。

 

通过合理选择基础培养基、严格操作流程和质量控制，可确保血琼脂平板的稳定性和实验结果的可靠性。

 

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