甘油生化管的使用方法与操作步骤及常见问题与应用场景！

 

百欧博伟生物：甘油生化管（通常称为甘油保存管或甘油菌种保存管）是微生物学中用于长期保存菌种的常用工具。其原理和使用方法如下：

 

一、原理

 

1、冷冻保护作用：

 

甘油（浓度15-30%）作为冷冻保护剂，能降低水的冰点，减少低温（如-80°C）冷冻时冰晶的形成，避免冰晶刺破细胞膜，从而保护微生物细胞结构的完整性。

 

2、抑制代谢与脱水：

 

高浓度甘油渗透到细胞内部，降低细胞质的水分活度，抑制代谢活动，使微生物进入休眠状态，实现长期保存。

 

二、使用方法

 

1、准备工作

 

材料：无菌甘油（浓度50%-80%，需高压灭菌或过滤除菌）、对数生长期的菌液、无菌冻存管、移液器、标签等。

 

甘油的灭菌：

 

高压灭菌（121°C, 15分钟）可能导致甘油分解，推荐使用0.22μm滤膜过滤除菌。

 

2、操作步骤

 

混合菌液与甘油：

 

将菌液与灭菌甘油按比例混合（例如：700μL菌液 + 300μL 50%甘油），最终甘油浓度为15%-20%。

 

震荡混匀，避免气泡。

 

分装与标记：

 

将混合液分装至无菌冻存管（每管0.5-1mL），标注菌株名称、日期等信息。

 

冷冻保存：

 

立即置于-80°C超低温冰箱保存。避免反复冻融，否则会降低存活率。

 

3、复苏菌种

 

用接种环刮取少量冻结菌液，直接划线接种至固体培养基，或融化后取少量液体接种。

 

三、注意事项

 

1、菌液状态：使用对数生长期的菌体（活力最强）。

 

2、甘油浓度：

 

浓度过高（>30%）可能产生毒性，过低则保护不足。

 

3、无菌操作：全程需在超净台操作，避免污染。

 

4、分装量：小体积分装（如1mL/管），避免反复冻融。

 

5、标签清晰：标注菌株名称、保存日期、浓度等关键信息。

 

四、常见问题

 

1、存活率低：可能因甘油浓度不当、菌种状态差或反复冻融导致。

 

2、污染：操作环境或甘油灭菌不彻底。

 

3、无法复苏：保存温度不稳定（如-20°C不适用长期保存）。

 

五、应用场景

 

实验室长期保存细菌、酵母、真菌等微生物菌种。

 

用于建立菌种库或备份重要实验菌株。

 

通过正确使用甘油生化管，微生物菌种通常可保存数年甚至数十年。若涉及特殊菌种（如严格厌氧菌），需根据其特性调整保存方法。

 

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