食品金黄色葡萄球菌的分离培养与生化鉴定及注意事项！

 

食品中金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的检测程序通常遵循国家标准或国际标准，以下是一般检测流程的详细步骤：

 

一、样品采集与处理

 

1、无菌采样

 

使用无菌工具采集食品样本（固体、液体或半固体），避免交叉污染。

 

样本量通常为25 g或25 mL，需冷藏（2~8）运输并尽快检测。

 

2、样品预处理

 

固体样品：加入225 mL无菌缓冲蛋白胨水（BPW）或0.1%蛋白胨水，均质处理。

 

液体样品：直接取25 mL检测，或稀释后使用。

 

二、选择性增菌培养

 

1、初次增菌（必要时）

 

若样品可能含受损菌体，使用7.5%氯化钠肉汤（或脑心浸液肉汤，BHI）在35~37培养18~24小时，促进目标菌复苏。

 

2、选择性增菌（针对高竞争性样品）

 

转种至含7.5%氯化钠的胰蛋白胨大豆肉汤（TSB），35~37培养24~48小时。

 

三、分离培养（选择性平板）

 

1、划线接种

 

取增菌液划线接种至选择性培养基：

 

琼脂：典型菌落为黑色、光滑，周围有浑浊带和透明圈（卵磷脂酶活性）。

 

血琼脂平板：菌落呈灰白色，周围有β-溶血环。

 

35~37培养24~48小时。

 

2、可疑菌落筛选

 

挑取典型菌落（平板优先）进行纯培养（如血琼脂或TSA）。

 

四、生化鉴定

 

1、初步鉴定

 

革兰染色：镜检为革兰阳性球菌，呈葡萄串状排列。

 

凝固酶试验（关键指标）：

 

试管法：与兔血浆混合，35培养4~6小时，凝固为阳性。

 

玻片法：菌落与血浆混合后10秒内凝集。

 

过氧化氢酶试验：阳性（区分链球菌）。

 

2、辅助试验（必要时）

 

甘露醇发酵试验：金黄色葡萄球菌可发酵甘露醇产酸。

 

DNA酶试验：在含甲苯胺蓝的DNA酶琼脂上形成粉红色晕圈。

 

耐热核酸酶检测：煮沸后仍能分解DNA（特异性高）。

 

五、分子生物学鉴定（可选）

 

1、PCR检测

 

扩增特异性基因。

 

2、质谱鉴定

 

MALDI-TOF MS快速鉴定菌种。

 

六、肠毒素检测（如需要）

 

ELISA法：检测肠毒素。

 

胶体金试纸条：快速筛查。

 

PCR法：检测肠毒素基因。

 

七、结果报告

 

1、定量检测（活菌计数）

 

按Baird-Parker平板典型菌落数计算CFU/g（或CFU/mL）。

 

公式：菌落数 = 平均菌落数 × 稀释倍数。

 

2、定性检测

 

报告检出/未检出金黄色葡萄球菌。

 

3、标准参考

 

中国《GB 4789.10-2016》：n=5, c=2, m=10² CFU/g, M=10³ CFU/g（具体限值依食品类别调整）。

 

八、注意事项

 

生物安全：操作应在生物安全二级实验室进行。

 

质控对照：每批次实验需包括阳性菌株（如ATCC 25923）和阴性对照。

 

交叉污染：严格区分无菌操作区与污染区，避免假阳性。

 

通过以上流程，可准确检测食品中金黄色葡萄球菌，确保食品安全性评估的可靠性。具体操作需参照最新国家标准或实验室标准操作程序。

 

北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！