微生物检验常用生化反应的原理与实验方法及应用与结果！

 

百欧博伟生物：在微生物检验中，生化反应是鉴定细菌或其他微生物的重要方法，通过检测微生物对不同底物的代谢能力（如产酸、产气、酶活性等）来区分其种类。以下是常用的生化反应及其原理和应用：

 

一、糖（醇）发酵试验

 

1、原理：检测微生物是否发酵特定糖（如葡萄糖、乳糖）或醇类产酸或产气。

 

2、方法：将菌种接种至含糖培养基（如酚红肉汤），加入杜氏管观察产气。

 

3、应用：

 

产酸：指示剂（酚红）变黄色。

 

产气：杜氏管内有气泡。

 

示例：大肠杆菌（发酵乳糖产酸产气）；沙门氏菌（不发酵乳糖）。

 

二、IMViC试验（用于肠杆菌科鉴定）

 

1、吲哚试验（Indole test）：

 

检测细菌能否分解色氨酸生成吲哚。

 

试剂：柯氏试剂（对二甲氨基苯甲醛）。

 

结果：液面显红色为阳性（如大肠杆菌阳性，产气肠杆菌阴性）。

 

2、甲基红试验（Methyl red test）：

 

检测产酸能力（pH ≤4.5）。

 

试剂：甲基红指示剂。

 

结果：红色为阳性（如大肠杆菌阳性，产气肠杆菌阴性）。

 

3、V-P试验（Voges-Proskauer test）：

 

检测细菌生成乙酰甲基甲醇的能力。

 

试剂：α-萘酚和KOH。

 

结果：红色为阳性（如产气肠杆菌阳性，大肠杆菌阴性）。

 

4、枸橼酸盐利用试验（Citrate utilization）：

 

检测能否利用枸橼酸盐作为唯一碳源。

 

培养基：西蒙氏枸橼酸盐培养基。

 

结果：变蓝色为阳性（如产气肠杆菌阳性，大肠杆菌阴性）。

 

三、氧化酶试验

 

原理：检测细胞色素氧化酶（参与电子传递链）。

 

试剂：四甲基对苯二胺（氧化酶试纸或试剂）。

 

结果：30秒内显紫色为阳性（如铜绿假单胞菌阳性，肠杆菌科阴性）。

 

四、过氧化氢酶试验（触酶试验）

 

原理：检测是否产生过氧化氢酶（分解HO为水和氧气）。

 

方法：滴加3% HO于菌落上。

 

结果：产生气泡为阳性（如葡萄球菌阳性，链球菌阴性）。

 

五、凝固酶试验

 

原理：检测金黄色葡萄球菌是否产生凝固酶（使血浆凝固）。

 

方法：菌落与兔血浆混合，37孵育。

 

结果：血浆凝固为阳性（如金黄色葡萄球菌阳性，表皮葡萄球菌阴性）。

 

六、尿素酶试验

 

原理：检测细菌能否分解尿素产氨。

 

培养基：尿素琼脂（含酚红指示剂）。

 

结果：变红色为阳性（如变形杆菌阳性，大肠杆菌阴性）。

 

七、硫化氢（HS）试验

 

原理：检测细菌分解含硫氨基酸（如胱氨酸）产生HS。

 

培养基：含铁离子的培养基（如TSI斜面、SIM培养基）。

 

结果：黑色沉淀为阳性（如沙门氏菌可能阳性）。

 

八、明胶液化试验

 

原理：检测细菌分泌明胶酶的能力。

 

方法：穿刺接种明胶培养基，4冷藏后观察是否液化。

 

结果：明胶液化（呈液态）为阳性（如铜绿假单胞菌阳性）。

 

九、硝酸盐还原试验

 

原理：检测细菌能否将硝酸盐（NO）还原为亚硝酸盐（NO）或氮气。

 

试剂：硝酸盐试剂（对氨基苯磺酸和α-萘胺）。

 

结果：红色为阳性（如大肠杆菌阳性）。

 

十、其他常用试验

 

苯丙氨酸脱氨酶试验：用于区分变形杆菌（阳性）与大肠杆菌（阴性）。

 

七叶苷水解试验：用于鉴定肠球菌和链球菌。

 

溶血试验：观察血琼脂平板上的溶血类型（α、β、γ溶血）。

 

十一、自动化生化鉴定系统

 

现代微生物实验室常用自动化系统快速鉴定微生物，通过多指标生化反应数据库比对完成鉴定。

 

通过组合这些生化反应，可准确区分细菌属或种（如大肠杆菌与肺炎克雷伯菌、金黄色葡萄球菌与表皮葡萄球菌等）。

 

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