细菌总数显色培养基的工作原理与使用方法及注意事项！

 

一、原理

 

1、特异性酶-底物反应：

 

显色培养基中添加了特定的显色底物（如荧光素、色原物质），这些底物与细菌代谢过程中产生的酶（如β-葡萄糖苷酶、β-半乳糖苷酶）特异性结合。当目标菌的酶分解底物时，释放出色原或荧光物质，使菌落呈现特定颜色。

 

例如：大肠杆菌分解X-Gluc（显色底物）后，菌落呈蓝色；金黄色葡萄球菌可能显粉红色。

 

2、选择性抑制与促生长：

 

培养基可能含有选择性抑制剂（如胆盐、抗生素）抑制非目标菌的生长。

 

添加营养物质（如碳源、氮源）促进目标菌增殖，提高检测灵敏度。

 

3、颜色区分与快速鉴定：

 

不同菌种因代谢差异产生不同颜色，无需额外生化试验即可初步鉴定，缩短检测时间（如18-24小时出结果）。

 

二、使用方法

 

1、培养基准备：

 

按照说明书配制，灭菌后倾注平板（或使用预装平板）。

 

若为干粉培养基，需用纯水溶解并高压灭菌（注意温度避免成分破坏）。

 

2、样品处理与接种：

 

样品稀释：液体样品直接接种；固体样品需均质后梯度稀释（如10倍系列稀释）。

 

接种方式：

 

涂布法：取0.1-0.2 mL样品涂布于平板表面。

 

倾注法：将1 mL样品与熔化的培养基混匀后倾注（适用于高菌量样品）。

 

3、培养条件：

 

温度：根据目标菌选择（常见35-37）。

 

时间：通常18-24小时（部分慢速菌需延长至48小时）。

 

需氧/厌氧：需氧培养为主，厌氧菌需特殊条件。

 

4、结果判读：

 

颜色判读：直接观察菌落颜色（如大肠杆菌显蓝色，沙门氏菌显紫色）。

 

计数规则：

 

仅计数符合目标菌颜色特征的菌落。

 

选择菌落数30-300的平板进行统计。

 

交叉验证：必要时通过镜检、PCR或生化试验确认结果。

 

三、注意事项

 

1、质量控制：

 

使用前用标准菌株（如大肠杆菌ATCC 25922）验证培养基性能。

 

阴性对照（无菌水）与阳性对照（含目标菌的样品）需同步检测。

 

2、保存与有效期：

 

未开封干粉需避光、干燥保存（通常2-25，有效期2年）。

 

配制后的培养基冷藏（2-8）并1周内使用，避免反复冻融。

 

3、干扰因素：

 

样品成分：高盐、强酸/碱性样品可能抑制显色反应，需调整pH或稀释。

 

杂菌竞争：过量非目标菌可能掩盖显色结果，需优化稀释度。

 

4、局限性：

 

无法区分死菌与活菌（需结合ATP检测）。

 

部分近缘菌种颜色相近（如某些肠球菌与链球菌），需进一步鉴定。

 

四、应用场景

 

快速筛查：食品、水质、医疗环境中的卫生指标菌（如大肠菌群）。

 

临床诊断：尿液、分泌物样本的病原菌初步鉴定（如尿路感染中的大肠杆菌）。

 

工业微生物控制：生产线微生物污染监测。

 

通过显色培养基，可实现高效、直观的细菌检测，显著提升实验室工作效率。

 

北京百欧博伟生物技术有限公司拥有对菌种、细胞、培养基、配套试剂等产品需求者的极优质服务，对购买项目的前期资料提供,中期合同保证,后期货物跟踪到最终售后的确保项目准确到位，都有相关人士进行维护,确保您在微生物菌种查询网中获得优质服务！也正因为此，北京百欧博伟生物技术有限公司与国内外多家研制单位、生物制药、第三方检测机构和科研院所院校、化工企业有着良好、长期和稳定的合作关系！