精氨酸支原体的培养与检测方法及质量控制与注意事项！

 

精氨酸支原体是一种依赖精氨酸作为代谢底物的支原体，其检测和培养方法在药品和生物制品的质量控制中具有重要应用。以下基于搜索结果对精氨酸支原体的培养基、检测原理及方法进行综合说明：

 

一、培养基类型及成分

 

精氨酸支原体的检测通常采用以下三种培养基形式，核心成分相似但形态不同：

 

1、肉汤培养基

 

成分：猪胃消化物（10.0 g/L）、牛肉浸粉（5.0 g/L）、酵母浸粉（5.0 g/L）、氯化钠（2.5 g/L）、葡萄糖（1.0 g/L）、L-精氨酸（2.0 g/L）、酚红（0.02 g/L），pH 7.1±0.2。

 

特点：液体形态，需添加20%灭活血清（如小牛血清）及青霉素（80万单位/L）以抑制杂菌生长。

 

2、半流体培养基

 

成分：在肉汤基础上添加琼脂（2.5 g/L），形成半固态环境，便于观察支原体运动性。

 

3、琼脂培养基

 

成分：琼脂含量更高（15.0 g/L），用于固体培养以观察菌落形态。

 

二、检测原理

 

1、代谢反应

 

支原体通过分解L-精氨酸产生碱性代谢物（如氨），使培养基pH升高，酚红指示剂由橙黄色变为红色。

 

2、选择性抑制

 

添加青霉素抑制细菌生长，血清提供支原体必需的脂类及生长因子。

 

三、检测方法（以《中国药典》2020版为依据）

 

1、样品接种

 

将待测样品稀释至10³~10梯度，接种3支培养基管。

 

2、培养条件

 

温度：36±1，环境：需氧或微需氧（部分培养基需封口膜封口）。

 

时间：7-14天，观察颜色变化或菌落形成。

 

3、结果判读

 

阳性：培养基变红（肉汤）或形成典型“荷包蛋”状菌落（琼脂）。

 

阴性：无颜色变化且对照试验符合要求。

 

四、质量控制与注意事项

 

1、质控菌株

 

常用口腔支原体ATCC 23714作为阳性对照，其培养后应显示明显生长及pH变化。

 

2、理化指标

 

培养基粉末需为均匀淡黄色，溶液透明无杂质，pH值7.1±0.2。

 

3、操作规范

 

避免灭菌后冷凝水污染，试管口需灼烧处理。

 

过期、变色或污染的培养基禁止使用。

 

五、应用与扩展

 

1、核酸检测

 

精氨酸支原体的核酸参考品可用于PCR试剂盒的阳性对照及交叉反应验证。

 

2、工业微生物检测

 

广泛用于疫苗、细胞培养物及生物制品的支原体污染筛查。

 

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