细胞培养中支原体污染现象与检测方法及处理与预防措施！

 

百欧博伟生物：细胞培养中的支原体污染是实验室中常见且具有挑战性的问题。支原体（Mycoplasma）是一类微小的原核生物，缺乏细胞壁，对常规抗生素（如青霉素）不敏感，因此污染后难以清除且容易被忽视。以下是关于支原体污染的详细解析：

 

一、支原体污染的特点

 

1、隐蔽性强：支原体直径仅0.2-0.3 μm，可通过常规滤膜（如0.22 μm滤器），污染初期无明显细胞形态变化。

 

2、代谢干扰：支原体依赖宿主细胞获取营养，长期污染会改变细胞代谢，导致生长缓慢、基因表达异常或实验结果偏差。

 

3、传播途径广：

 

人员操作：实验人员携带（如唾液、皮肤接触）；

 

试剂污染：血清、培养基或消化酶被污染；

 

交叉污染：已污染的细胞系传播至其他培养物。

 

二、污染的可能表现

 

1、直接观察：

 

细胞状态逐渐变差（如生长迟缓、贴壁性下降）；

 

培养液轻微浑浊（需与细菌污染区分）；

 

细胞核异常（如碎片增多、核周空泡）。

 

2、间接影响：

 

实验数据异常（如转染效率下降、凋亡率升高）；

 

细胞周期或代谢相关实验结果不可重复。

 

三、检测方法

 

1、PCR法：特异性引物扩增支原体DNA（如16S rRNA基因），灵敏度高，可快速检测（常用商业试剂盒）。

 

2、荧光染色法：Hoechst 33258染色后荧光显微镜观察，支原体附着在细胞表面呈细小蓝色颗粒。

 

3、培养法：将样本接种于支原体专用培养基，耗时较长（数周），但特异性高。

 

4、ELISA或电镜：较少常规使用，适用于特定研究。

 

四、污染处理措施

 

1、立即隔离：将污染细胞与其他培养物分开，避免交叉污染。

 

2、彻底清除：

 

丢弃污染细胞：建议直接废弃珍贵性不高的污染细胞；

 

抗生素处理：使用支原体特异性抗生素，需注意：

 

治疗周期长（2-3周），可能诱导细胞应激；

 

无法100清除，需后续严格检测。

 

3、环境消毒：用支原体杀灭剂处理培养箱、超净台等。

 

五、预防策略

 

1、严格无菌操作：

 

佩戴口罩和手套，避免说话或触碰培养液；

 

定期更换水浴锅中的水，并添加抑菌剂。

 

2、试剂质量控制：

 

选择经过支原体检测的血清和培养基；

 

分装试剂，避免反复冻融污染。

 

3、定期检测：

 

新购入细胞系必须检测；

 

每1-2个月对常用细胞进行抽检。

 

4、细胞库管理：

 

冻存原始细胞种子库，避免长期传代增加污染风险；

 

新细胞系需在独立培养箱中隔离培养1个月。

 

六、支原体污染的潜在后果

 

科研影响：导致实验结果不可靠或数据发表后被质疑；

 

经济损失：污染可能导致珍贵细胞系丢失或实验重复；

 

生物安全风险：某些支原体（如M. fermentans）可能对人体有害。

 

七、总结

 

支原体污染是细胞培养中的“隐形杀手”，防控需结合严格的操作规范、定期检测和实验室管理。一旦发现污染，需果断处理并追溯污染源。建议实验室建立标准操作流程（SOP），并培训人员提高防范意识。对于关键实验，可考虑使用支原体检测阴性的认证细胞系（如ATCC提供的细胞）。

 

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