平板划线分离法的实验原理与操作步骤及注意事项！

 

平板划线分离法是微生物学中用于分离纯化微生物（如细菌、真菌等）的常用技术，通过物理稀释样品中的微生物，最终获得单个菌落（由单一微生物繁殖形成的群体）。以下是该方法的详细说明：

 

一、操作步骤

 

1、准备材料

 

固体培养基平板（如营养琼脂平板）。

 

接种环（金属或一次性塑料材质）。

 

待分离的微生物样品（如菌液或混合菌悬液）。

 

酒精灯（用于无菌操作）。

 

2、灭菌接种环

 

将接种环在酒精灯火焰上灼烧至红热，冷却数秒（避免高温杀死微生物）。

 

3、蘸取样品

 

用冷却后的接种环蘸取少量菌液（或挑取少量菌苔）。

 

4、划线分离

 

第一区划线：在平板表面轻轻划3-5条密集的“之”字形线条（约占平板1/4面积）。

 

第二区划线：灼烧接种环，冷却后从第一区的末端延伸划出3-5条线（约占平板1/4面积）。

 

第三、四区划线：重复灼烧、冷却和划线步骤，逐渐稀释菌液（如图示，后一区与前区部分重叠）。

 

5、培养

 

倒置平板，置于恒温培养箱中培养（温度和时间依微生物种类而定）。

 

二、原理

 

1、物理稀释：通过多次划线，微生物被逐渐分散，最终在第四区形成单个菌落。

 

2、固体培养基：固定微生物位置，菌落只能在划线处生长，便于观察和挑取。

 

三、注意事项

 

1、无菌操作

 

全程靠近酒精灯火焰操作，避免杂菌污染。

 

每次划线前需灼烧接种环，冷却后再接触菌液。

 

2、手法轻柔

 

划线时勿刺破培养基表面，以免菌体在内部生长。

 

3、控制稀释度

 

若最终区域无单菌落，可能因初始菌液浓度过高，需重新稀释样品。

 

4、标记与记录

 

标记平板分区及样品信息，培养后观察菌落形态并记录。

 

四、应用

 

分离纯培养物（获得单一菌种）。

 

观察微生物菌落形态（颜色、大小、边缘等）。

 

用于菌种鉴定、保存或进一步实验（如抗生素敏感性试验）。

 

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