微生物实验室检测工作的重要环节之培养基的制备与使用！

 

 

培养基的制备和使用是微生物实验室检测工作的核心环节，直接影响实验结果的准确性和可靠性。以下是培养基制备与使用的系统性指南，涵盖关键步骤、注意事项及常见问题解决方案：

 

一、培养基的类型与选择

 

1、按用途分类：

 

基础培养基：支持多数微生物生长（如营养琼脂、肉汤）。

 

选择性培养基：抑制非目标菌，促进目标菌生长（如麦康凯琼脂抑制革兰氏阳性菌）。

 

鉴别培养基：通过显色或代谢产物区分微生物（如伊红美蓝琼脂鉴别大肠杆菌）。

 

富集培养基：增强特定微生物增殖（如硫乙醇酸盐流体培养基用于厌氧菌）。

 

专用培养基：针对特殊微生物（如鲍-金培养基用于百日咳鲍特氏菌）。

 

2、按形态分类：

 

液体培养基：用于增菌或生化试验。

 

固体培养基（含1.5-2%琼脂）：分离单菌落。

 

半固体培养基（0.3-0.5%琼脂）：观察动力或保存菌种。

 

二、培养基制备流程

 

1、材料准备

 

试剂与原料：按配方称量蛋白胨、牛肉膏、琼脂等，注意纯度（如微生物级琼脂避免杂质）。

 

器材灭菌：玻璃器皿（培养皿、试管）和蒸馏水需高压灭菌（121, 15-20分钟）。

 

2、配制步骤

 

溶解：

 

将称量好的成分加入蒸馏水，加热搅拌至完全溶解（琼脂需煮沸至透明）。

 

避免局部过热导致焦化（可水浴加热）。

 

调节pH：

 

使用pH计或试纸，用1M NaOH或HCl调节至目标值（如营养琼脂pH 7.2-7.4）。

 

灭菌后pH可能下降0.1-0.3，需预先校准（如目标pH设为7.6）。

 

分装：

 

液体培养基分装至试管（1/3高度），固体培养基分装至锥形瓶（不超过容积的2/3）。

 

灭菌：

 

高压蒸汽灭菌（121, 15-20分钟）；不耐高温成分（如抗生素、血清）需过滤除菌（0.22μm滤膜）。

 

倾注平板：

 

灭菌后冷却至50左右（手触不烫），无菌操作倾注至培养皿（15-20mL/皿），凝固后倒置保存。

 

三、质量控制与验证

 

1、无菌性测试：

 

随机抽取3%培养基，37培养24-48小时，确认无微生物生长。

 

2、生长性能测试：

 

接种标准菌株（如大肠杆菌ATCC 25922），观察生长是否符合预期（菌落形态、大小、颜色）。

 

3、pH复核：

 

灭菌后随机检测pH，偏差超过±0.2需重新配制。

 

4、水分控制：

 

固体培养基避免反复融化，开封后密封保存防脱水。

 

四、使用注意事项

 

1、储存条件：

 

未灭菌原料：干燥避光，防潮防虫。

 

灭菌后培养基：液体4保存≤2周；固体平板2-8保存≤1个月（避光防冷凝水）。

 

2、操作规范：

 

无菌操作：超净工作台内酒精灯旁操作，避免交叉污染。

 

标识清晰：标注培养基名称、配制日期、有效期及批号。

 

3、分装与使用：

 

避免反复冻融液体培养基；倾倒平板前摇匀（防沉淀）。

 

使用前恢复至室温（冷培养基易结露影响接种）。

 

五、常见问题与解决

 

六、特殊培养基的优化

 

1、厌氧培养基：

 

添加还原剂（半胱氨酸、硫乙醇酸钠），使用前煮沸驱氧。

 

2、高渗培养基：

 

增加NaCl浓度（如7.5% NaCl肉汤用于葡萄球菌选择性增菌）。

 

3、指示培养基：

 

添加pH指示剂（如酚红）或显色底物（如X-gal用于β-半乳糖苷酶检测）。

 

七、安全与环保

 

1、废弃物处理：

 

污染培养基需高压灭菌后再丢弃（121, 30分钟）。

 

2、化学品防护：

 

配制时佩戴手套、护目镜，避免吸入粉末（如抗生素、染色剂）。

 

八、总结

 

培养基的制备与使用需严格遵循标准化流程，从配方选择、灭菌控制到质量验证环环相扣。实验室人员应掌握常见问题的快速诊断与处理技能，并定期开展培养基性能验证，确保检测结果的准确性和可重复性。通过优化制备工艺和加强操作规范，可显著提升微生物检测效率与可靠性。

 

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