紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基的适用性检查与实验方法！

一、培养基原理

明胶水解物提供微生物生长所需的基本氮源和碳源，酵母浸出粉提供细菌生长所需的维生素等，葡萄糖提供碳源，结晶紫与脱氧胆酸钠联合可抑制多数革兰氏阳性细菌生长，氯化钠提供适宜的生理环境，中性红为酸碱指示剂，酸性变红，碱性变黄，琼脂为凝固剂。

细菌利用葡萄糖会产酸使pH下降，在中性红与结晶紫联合着色的作用下使菌落呈紫红色，同时利用葡萄糖产生的酸与脱氧胆酸钠反应形成沉淀，从而在菌落周围形成不透明沉淀圈。

二、所需菌种

大肠埃希氏菌(Escherichia coli)[CMCC(B)44102]

金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus) [CMCC(B)26003]

铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa)[CMCC(B)10104]

三、检查项目

促生长能力、指示能力、抑制能力（此项建议添加）

四、检查方法

平皿涂布法，同步使用对照培养基与待检培养基

五、菌液制备与稀释

挑取四代以内（含四代）上述菌种的新鲜培养物至胰酪大豆胨液体培养基中，30～35培养18～24h，使用pH7.0氯化钠蛋白胨缓冲液或0.9%氯化钠溶液进行十倍稀释，制成每0.1ml含小于100cfu的菌悬液(稀释梯度：通常情况下为10-6)。金黄色葡萄球菌稀释成每0.1ml含不少于100cfu的菌悬液(稀释梯度：通常情况下为10-5)

六、培养基制备

被检培养基：称取培养基8.3g于200ml纯化水中,搅拌加热煮沸一分钟使完全溶解(如有浮沫，使用药匙置轻轻撇去)，冷至50左右倾注平板(每皿20ml左右)

对照培养基：按照说明书中的比例称取，其它步骤同上。

将制备好的平板做好标记，条件允许的话置于30～35培养箱中预置约2～4h，目的是消除琼脂表面多余的水分，以便涂布操作。

七、实验方法

1、培养基阳性组：

（1）大肠埃希氏菌、铜绿假单胞菌：取稀释后的菌悬液0.1ml加于预制的平板中，涂布均匀（涂布操作注意避免菌液过多的存在于平皿边缘，当涂布过程感觉平板表面比较干燥时即认为涂布完成）。每种试验菌各做2个平行对照。

（2）金黄色葡萄球菌：取稀释后的菌悬液0.1ml加于预制的平板中，涂布均匀，做一个平板即可，用于抑制能力检查。

2、培养基阴性组：待检培养基与对照培养基，同时各做一个空白对照，即不添加菌液。

3、对照培养基与被检培养基接种方法均按照上述说明操作，同时在平皿底部做好分类标记。

4、置30～35培养箱中培养18～24h。

5、计数并观察菌落特征。

八、计算方法

回收率/生长率＝（被检培养基阳性组平均菌落数—被检培养基阴性组平均菌落数）/（对照培养基阳性组平均菌落数—对照培养基阴性组平均菌落数）×100%。

九、判定依据

若生长率在0.5～2.0，且菌落形态大小应与对照培养基一致，则判定合格。

易欧赛生物（EOUCELL）是由北京百欧博伟生物技术有限公司开创的专注于科研细胞及其周边产品研发及提供的高端品牌，主要业务涵盖原代细胞、细胞系，细胞培养基及细胞周边耗材等！2024年6月30日，北京百欧博伟生物技术有限公司与武汉易欧赛生物技术有限公司签订战略合作协议，由武汉易欧赛生物技术有限公司进行北京百欧博伟生物技术有限公司品牌易欧赛生物的全方位生物技术支持！