胎牛血清(无支原体)的营养功能及应用研究！

一、知识背景

胎牛血清(无支原体)以健康胎牛血液为原料加工而成，经0.65μm、0.22μm微孔滤膜预过滤，3次0.1μm微孔滤膜精过滤后，获得成品胎牛血清。本产品无支原体污染、内毒素水平极低。本产品已通过多种细胞培养验证实验、细胞生长状态良好，细胞倍增速度正常。

胎牛血清是一种性状、外观浅黄色澄清、无溶血、无异物稍粘稠液体。胎牛血清应取自剖腹产的胎牛；新牛血清取自出生24小时之内的新生牛；小牛血清取自出生10－30天的小牛。

显然，胎牛血清是品质最高的，因为胎牛还未接触外界，血清中所含的抗体、补体等对细胞有害的成分最少。

二、营养功能

牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。

1、提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。

2、提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。

3、有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。

4、是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。

5、起酸碱度缓冲液作用。

6、提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。

三、应用

用于不同来源血清对成人骨髓基质干细胞增殖及分化的研究：

骨髓基质干细胞(marrow mesenchymal stromal cells,MSCs)因其取材方便,可在体外大量扩增并保持成骨潜能,较低的免疫原性,转入外源基因后不影响其增殖、分化特性等特点,被认为是骨组织工程理想的种子细胞。传统的细胞培养方法采用胎牛血清作为营养支持。尽管优质胎牛血清经过了严格的处理,但仍然存在潜在传播疾病的风险和免疫排斥反应。

许多研究者采用无血清培养方法,但代价太高,并且周期较长,约40 d～45 d；应用诱导剂和细胞因子,费用也相当可观。寻找胎牛血清替代物并建立成人骨髓基质干细胞(human bone marrow mesenchymal stromal cells,hBMSCs)规范、安全、高效的体外培养体系刚刚起步,有待进一步研究。

采用AB血清(AB serum,ABS)、自体血清(autologous serum,AS)替代胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)作为营养基质,比较3种不同培养体系体外培养hBMSCs增殖分化的效果,为骨组织工程由基础研究向临床应用提供一定的理论依据。研究目的探讨AB血清、自体血清替代胎牛血清体外培养成人骨髓基质干细胞增殖及成骨分化的效果,并初步探讨其促成骨的机制。