人血清(混合血型)的背景与应用及保存方法！

一、背景

人血清(混合血型)是由血浆去除纤维蛋白原而形成的一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已知，但还有一部分尚不清楚，且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清是血浆中不含纤维蛋白原的胶状液体,具有维持血液的正常粘度、酸碱度、渗透压等作用。它主要由水和各种化学成分组成,这些化学成分包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白,甘油三酯,总胆固醇,谷丙转氨酶等。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。

人血清（混合血型）经无菌采集、分离、微孔过滤后而成，性状为澄清液体，无噬菌体、低内毒素，无溶血无异物无细菌真菌支原体霉形体衣原体等，适用于试验室或生化科研相关试验，满足不同科研实验的多种需求。

保存方法：血清应保存在-5至-2。然而，若存放于4时，请勿超过一个月。若您一次无法用完一瓶，建议将无菌分装血清至恰当的灭菌容器内，再放回冷冻。如何解冻血清才不会使产品质量受损？将血清从冷冻箱取出后，先置于2-8C冰箱使之溶解，然后在室温下使之全溶。但必须注意的是，溶解过程中必须规则地摇晃均匀。

二、避免沉淀

1、解冻血清时，请按照所建议的逐步解冻法(-2至4至室温)，若血清解冻时改变的温度太大(如-20至37，实验显示非常容易产生沉淀物。

2、解冻血清时，请随时将之摇晃均匀，使温度及成分均一，减少沉淀的发生

3、请勿将血清置于37太久。若在37放置太久，血清会变得混浊，同时血清中许多较不稳定的成分也会因此受到损害，而影响血清的质量。

4、血清的热灭活非常容易造成沉淀物的增多，若非必要，可以无须做此步骤。

5、若必须做血清的热灭活，请遵守56，30分钟的原则，并且随时摇晃均匀。温度过高，时间过久或摇晃不均匀，都会造成沉淀物的增多。

三、应用

用于高灵敏人血清HER2蛋白检测方法的建立及临床应用研究：

使用血清中HER2水平的变化趋势用作评价肿瘤的治疗效果以及作为肿瘤患者预后的评估指标,但是由于目前国内灵敏度较高的血清HER2的检测方法的技术尚缺,因此本实验一项人血清中HER2蛋白含量高灵敏检测技术,并进行临床标本检测,为肿瘤治疗及预后评估提供参考。

材料与方法：实验室从以下几方面来建立人血清HER2检测方法:（1）抗HER2的单克隆抗体HuA21与HerA以及高纯度的标准抗原HER2-ECD的制备:以适应的浓度接种培养本实验室保存的CHO细胞,待细胞培养至90%密度时分别转染含HuA21、HerA、HER2-ECD基因的表达载体,待24小时的继续培养后用胰酶进行消化并将其传代培养,并往培养基内加入0.3mg/ml Zeocin混合成选择性培养基用来筛选抗性克隆。将得到的高表达抗性克隆逐级扩大培养,收取培养的上清液,进一步纯化、浓缩,采用SDS-PAGE非还原电泳技术纯化抗体HuA21、HerA,采用BCA法蛋白定量试剂盒测定HER2-ECD标准抗原的含量,并与美国批准临床使用的血清HER-2/neu ELISA测定试剂盒检测结果进行比对。

（2）运用双抗体夹心酶联免疫吸附实验（ELISA）技术,分别以抗HER2单克隆抗体HuA21为包被抗体,生物素标记的HerA作为检测抗体,将得到的抗原标准品HER2-ECD构建检测血清中HER2蛋白含量技术,并以此作为配对抗体亲和力、特异性、稳定性的检测以及配对抗体浓度、反应所需试剂和反应条件的优化等；

（3）收集合肥地区的乳腺癌患者的血清标本,使用研制的试剂盒进行检测,并与西门子医学诊断产品有限公司的类似试剂盒对比实验进行检测,运用student’s t检验等统计方法对实验结果进行分析总结。

结果：纯度较高的抗HER2单克隆抗体HuA21和HerA由本实验制备成功。对实验设计使用的试剂盒各项组分进行优化,从而确定了高灵敏人血清HER2检测试剂盒的包被抗体和检测抗体抗分别为HuA21和生物素标记的HerA。由上述方法所建立的ELISA方法检测灵敏度为7.8 pg/ml,检测范围为0-500 pg/ml,其批内变异系数为0.2%~10.9%,批间变异系数为1.4%~12.4%,在人血清中的抗原回收率在86.84%~116.40%之间,与上海西门子公司的化学发光法试剂盒测定临床血清HER2含量相比较,实验结果表明二者之间的差异无明显的统计学意义（P＞0.05）,且其两者之间的相关性（R2＞0.70）具有明显的一致性。

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