小鼠下丘脑神经元细胞的复苏与冻存操作说明！

细胞简介

平台编号：Bio-129796

细胞信息：MHypoE-N43/5

规格：1×10Cells/T25培养瓶

细胞名称：小鼠下丘脑神经元细胞mHypoE-N43/5

产品规格：T25培养瓶x1；1.5ml冻存管x2

细胞数量：1x10^6；1x10^6

保存温度：37；-198

运输方式：常温保温运输；干冰运输

安全等级：1

用途限制：仅供科研3类

培养体系：DMEM高糖（HYCLONE SH30022.01)+10S+1%三抗+200ug/ml IL2

培养温度：37

二氧化碳浓度：5%

简介：小鼠下丘脑神经元细胞mHypoE-N43/5取自小鼠胚胎下丘脑组织，该细胞经过SV40永生化处理。

注释：倍增时间38h

用途：细胞系

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

复苏细胞收货注意事项

收到细胞后，静置 3 小时，然后当天更换新鲜培养基！！！原瓶培养基不能继续使用 ！！！ 该细胞订单用户订购前，需核实确认。

培养基货号 DMEM(HYCLONE SH30022.01 或 GIBCO C11965500BT）

胎牛血清（GIBCO 10099-141），必须与我们保持一致，如坚持使用不同货号培养基或者血清培养，产生售后问题，不予支持补发。培养基正常 pH 值为 7.2-7.4，颜色呈现微红偏黄，若颜色发生偏差变化，需要尽快更换完全培养基。

冻存细胞收货注意事项

收到细胞后，当天存入-80冰箱或者-196的液氮罐中保存 ！！！ 该细胞订单用户订购前，需核实确认（冻存细胞以收到细胞后起 14 天之内为售后保障期 ，不是保存多日开始复苏后的 14 天之内 ）

培养基货号 DMEM(HYCLONE SH30022.01 或 GIBCO C11965500BT）

胎牛血清（GIBCO 10099-141），必须与我们保持一致，如坚持使用不同货号培养基或者血清培养，产生售后问题，不予支持补发。培养基正常 pH 值为 7.2-7.4，颜色呈现微红偏黄，若颜色发生偏差变化，需要尽快更换完全培养基。

常见问题

1、运输途中，细胞会因为晃动造成细胞脱落，此现象为正常现象，观察后，静置 3 小时。

2、传代后细胞漂浮原因：传代前密度过大导致细胞挤出凋亡；消化过度；移液枪吹打力道过大。

3、细胞复苏后贴壁性不好，尝试换液并血清提至 15%，待观察，若效果还不佳，需要联系销售及技术老师。

4、本产品有添加支原体抗污染剂及三抗（青霉素，链霉素，两性霉素 B），若收到细胞后 2 天内，发现细胞 污染，请立即联系对应销售进行补发；3-14 天之内的污染，需要联系对应销售沟通并且核实详情后，进行下一步售后处理。

细胞复苏操作说明（针对冻存细胞）

实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜 ，水浴锅 ，离心机

实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，三抗

实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需复苏的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管

实验步骤：

1、从液氮罐中取出冻存管 ，直接浸入 37温水中 ，并不时摇动令其尽快融化。

2、从 37水浴中取出冻存管 ，打开盖子 ，移液枪吸出细胞悬液 ，加到离心管并滴加 5 倍以上完全培养基并混匀 。

3、操作离心 ，调至 1000 转/分 ，时长 10 分钟

4、弃去上清液 ，重悬离心管底部细胞沉淀，在 T25 培养瓶中加入 5-6ml 完全培养基 ，计数 ，调整细胞密度，接种培养瓶 ，37培养箱静置培养。

5、次日更换一次培养液，继续培养。

6、注意：冻存细胞建议三管一起复苏到一个 T25 培养瓶中

细胞冻存操作说明

实验仪器：超净工作台 ，CO2 培养箱 ，倒置显微镜，离心机

实验试剂：DMEM 培养基 ，胎牛血清 ，0.25%胰酶，三抗 ，DMSO

实验材料：T25 细胞培养瓶 ，需冻存的细胞 ，移液枪 ，枪头 ，离心管 ，冻存管 ，记号笔

实验步骤：

1、取待冻存的细胞（按 T25 计 ）用 0.25EDTA 胰酶 2ml 消化 2min ，用完全培养基将细胞冲洗下来。1000r/min 离心 10min ，弃上清收集细胞。如果是悬浮生长的细胞 ，则可直接离心收集细胞。

2、加入 1ml 冻存液(90S+10%DMSO )制成细胞悬液。

3、细胞悬液装入 3 支冻存管中。

4、冻存管在 4下存放 30 min ，转放-20 1.5～2 h ，再转人-70 4-12 h 后即可转移到液氮内(- 196) ，并登记。