大鼠骨髓来源巨噬细胞的传代培养与注意事项！

一、产品信息

平台编号：Bio-108893

规格：1×10Cells/T25培养瓶

细胞信息：原代细胞

产品名称：大鼠骨髓来源巨噬细胞

组织来源：骨髓

产品规格：5×105cells/T25细胞培养瓶

细胞只能传1代：细胞是诱导的

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、细胞简介

大鼠骨髓来源巨噬细胞分离自骨髓；骨髓是机体的造血组织，位于身体的许多骨骼内。成年动物的骨髓分两种：红骨髓和黄骨髓。红骨髓能制造红细胞、血小板和各种白细胞。血小板有止血作用，白细胞能杀灭与抑制各种病原体，包括细菌、病毒等；某些淋巴细胞能制造抗体。因此，骨髓不但是造血器官，它还是重要的免疫器官。骨髓是存在于长骨(如肱骨、股骨)的骨髓腔和扁平骨(如髂骨)的稀松骨质间的网眼中，是一种海绵状的组织，能产生血细胞的骨髓略呈红色，称为红骨髓。出生时，红骨髓充满全身骨髓腔，随着年龄增大，脂肪细胞增多，相当部分红骨髓被黄骨髓取代，最后几乎只有扁平骨骨髓腔中有红骨髓。巨噬细胞属免疫细胞，有多种功能，是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象。巨噬细胞较易获得，便于培养，并可进行纯化。巨噬细胞属不繁殖细胞群，在条件适宜下可生活2-3周，多用做原代培养，难以长期生存。巨噬细胞(Macrophages)是一种位于组织内的白血球，源自单核细胞，而单核细胞又来源于骨髓中的前体细胞。巨噬细胞和单核细胞皆为吞噬细胞，在脊椎动物体内参与非特异性防卫(先天性免疫)和特异性防卫(细胞免疫)。它们的主要功能是以固定细胞或游离细胞的形式对细胞残片及病原体进行噬菌作用(即吞噬以及消化)，并激活淋巴球或其他免疫细胞，令其对病原体作出反应。

三、方法简介

实验室分离的大鼠骨髓来源巨噬细胞采用分离骨髓单个核细胞经细胞因子诱导分化法制备而来，细胞总量约为5×10cells/瓶。

四、质量检测

实验室分离的大鼠骨髓来源巨噬细胞经CD68免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

五、培养信息

培养基 含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等

换液频率 每2-3天换液一次

生长特性 贴壁

细胞形态 巨噬细胞样

传代特性 属于终末分化细胞；属于不增殖细胞群

消化液 利多卡因（12mM）

培养条件 气相：空气，95%；CO2，5%

大鼠骨髓来源巨噬细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

六、传代培养

传代前准备--胰蛋白酶消化--吹打分散细胞--分装稀释细胞--继续培养

1)将培养瓶内旧的培养液弃掉,然后用D-Hanks液洗两次,(一定要洗干净,以免影响胰酶的消化作用)。

2)加入0.25%胰酶-EDTA消化,25cm培养瓶加0.4ml,37度消化5min,镜下看到细胞变圆,间隙增大。

3)立即加含10S的培养液终止消化,用细胞刮刀轻刮,注意,这时候用吸管吹不下来,但是刮刀却很容易刮下来,而且对细胞的损伤极小。

4)离心,弃上清,加新的培养液(10S),小心吹匀,分装入新的培养瓶。

七、注意事项

(1)冻存前细胞状态,细胞*在对数生长期,细胞密度适合,刚刚发生细胞融合,过密或连成片的细胞状态不好,而且消化时不容易分散;

(2)冻存的密度不宜过低,10的6次方-7次方的数量级比较好,我冻存的细胞一般T25培养瓶(5*107),一瓶冻一管(1.5ml冻存管),10cm培养皿(大概10的8次方个细胞)分成两管。

(3)消化和吹打,切忌胰酶消化过度,吹打不可太用力,*不要吹出好多泡泡。消化后立即加入完全培养基吹打哦,不是加入冻存液再吹打。

(4)离心后加入冻存液。冻存液中FBS的用量对于细胞株而言要求不是很严格,我从10%-90%都用过,问题不大,个人认为10%-20%可以了,能节约处就节约点嘛!另外,冻存液可以在处理细胞前配置,放在4度冰箱预冷。细胞离心后直接用预冷的冻存液重悬,移入冻存管。

(5)关于“慢冻”,传统的方法,LLC细胞冻存管用棉花包好,4度2h,-20度2h或更长,-80度过夜,*液氮。对于条件较好的实验室和细胞冻存数量多的实验室,推荐使用程序降温盒,内装异丙醇,在-80度并内可以逐渐降温,很方便,省了包棉花、4度、-20度了。