大鼠内脏脂肪细胞提取物的背景与应用研究！

一、背景

大鼠内脏脂肪细胞提取物是从大鼠原代内脏脂肪细胞提取的，大鼠原代内脏脂肪细胞从正常大鼠脂肪组织制备。大鼠内脏脂肪细胞提取物可以用于基因克隆，表达图谱分析以及各种分子生物学实验的研究。脂肪细胞在体内的主要生理功能是：以甘油三酯的形式存储在体内，并在机体需要时供给能量。

脂肪细胞的合成代谢主要包括吸收和合成两个过程，甘油三酯可被肠黏膜细胞分解为甘油和脂肪酸，通过门静脉进入血液循环，而长链脂肪酸可在肠黏膜细胞重新合成甘油三酯后与载脂蛋白结合成乳糜微粒，通过淋巴管进入血液循环。

脂肪细胞的分解代谢是储存在细胞中的脂肪被脂肪酶逐步水解成游离脂肪酸以及甘油释放人血，并被其他组织所氧化利用的过程。当机体需要时，存储的脂肪首先在脂肪酶的催化下分解为甘油和脂肪酸。甘油主要在肝脏被利用，经过生化反应分解供能或转变为糖。脂肪酸的氧化分解可在心、肝、骨骼肌等许多组织细胞内进行。

内脏是指在体腔内，借管道直接或间接与外界相通的器官的总称。主要包括人体胸腹部内脏器官的分布：肝脏、胆囊、胃、肾、小肠、脾、直肠、十二指肠、胰、输尿管、卵巢、膀胱、子宫。其中，小鼠内脏脂肪细胞主要存在于结缔组织中，能够合成和贮存脂肪。成熟的脂肪细胞呈圆形，胞浆内富含脂滴。脂肪细胞在脂类代谢，能量平衡以及抵抗炎症等方面起重要作用，与肥胖，高血脂、糖尿病、乳癌等多种生理疾病密切相关。利用试剂盒中提供的内脏组织分离体系来分离，EDTA/EGTA处理过的内脏组织能使得内脏组织中脂肪细胞的一些功能特性发生改变，从而将脂肪细胞分离开来。还能保证所分离的细胞在培养基中具有很高的活性。利用的成纤维抑制体系，可以程度地降低所培养的脂肪原代细胞中成纤维细胞的含量。

二、应用

大鼠内脏脂肪细胞提取物可用于大鼠胰岛β细胞GPR40表达与内脏脂肪含量及胰岛素1相分泌的关系研究：

糖尿病,是一种由于胰岛素对糖代谢的调节障碍所致的代谢性疾病,以血糖水平持续升高为特征,最终会导致机体各器官的损害。由于发病率的不断升高,目前已成为世界性的健康问题。肥胖是导致糖尿病的危险因素之一,研究显示,肥胖与胰岛素抵抗和2型糖尿病(type 2 diabetes mellitus,T2DM)密切相关。有研究者认为,脂代谢紊乱是糖尿病的原发病理生理变化,即脂毒性学说,并提出糖尿病其实是糖脂病的观点。

肥胖所致的内脏脂肪沉积和血游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)水平的升高是导致脂毒性的关键因素。FFA通常被认为通过其进入细胞后的一系列代谢反应及产生脂质衍生物调节胰岛素的分泌。2003年,Itoh等研究者提出G蛋白偶联受体40(G protein coupled receptor 40,GPR40)作为中、长链游离脂肪酸的受体在胰岛β细胞高表达,并指出其参与了FFA介导的胰岛素分泌并且可能与肥胖介导的T2DM有关,使GPR40成为治疗T2DM可能的药物靶点。

研究显示,FFA能够通过激活胰岛β细胞的GPR40增加葡萄糖刺激的胰岛素分泌(glucose-stimulated insulin secretion,GSIS)。通过siRNA下调β细胞GPR40的表达会导致FFA介导的细胞内Ca2+应答及胰岛素分泌的显著抑制,提示胰岛β细胞GPR40通过介导β细胞Ca2+信号反应参与了FFA刺激的胰岛素分泌。表明GPR40可能对肥胖状态下葡萄糖刺激的胰岛素分泌存在调控作用。