人阴道上皮细胞收到后的处理方法与培养步骤！

细胞简介

平台编号：Bio-133661

规格：1×10^6cells/T25培养瓶

细胞信息：VK2

细胞名称：人阴道上皮细胞

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

详细描述

产品类别：人源细胞系

生长特性：贴壁生长

培养体系：DMEM+10S

传代方法：1：2传代

细胞形态：上皮细胞样

冻存条件：无血清细胞冻存液  

英文名称：VK2  

中文名称：人阴道上皮细胞  

生长特性：贴壁生长  

冻存条件：无血清冻存液  

培养体系：DMEM+10S  

传代方法：第一次建议1:2传代  

传代情况：2天换液  

备注：用无菌离心管收集瓶子培养基，留作过渡培养  

细胞收到后处理方法

细胞在培养瓶中培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口是细胞运输的最好办法。收到细胞回到自己的实验室后，先打开外包装，用75%酒精喷洒整个瓶消毒后放到超净台内，严格无菌操作，培养箱静置2-4小时。镜下观察：未超过80%汇合度时，可将瓶装的完全培养液收集至离心管中，加入6ml完全培养基，放入37、5%CO2孵箱培养；超过80%汇合度时，根据情况传代或者冻存，具体操作见细胞培养步骤。（注意发货的是密封培养瓶的话，放入培养箱培养记得培养瓶盖子拧松）  

细胞培养步骤  

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加4-6mL完全培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中），培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。  

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。  

1、对于贴壁细胞，传代可参考以下方法：  

1.弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。  

2.加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mMEDTA）于培养瓶中，置于37培养箱中消化1-2min，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加5ml以上含10%血清的完全培养基终止消化。  

3.轻轻吹打细胞，完全脱落后吸出，在1000RPM条件下离心8-10分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。  

4.按5-6ml/瓶补加培养液，将细胞悬液按1：2的比例分到新的含5-6ml培养液的新皿中或者瓶中。  

PS：若客户收到2ml小管细胞，收到细胞后，用75%酒精喷洒整个管子消毒后放到超净台或安全柜内，严格无菌操作；将小管细胞转移至T25培养瓶或6cm培养皿，加入5ml左右完全培养基混匀，放入培养箱过夜培养后查看细胞密度：若密度未超过80%，换液继续培养，视情况传代或者冻存。若密度超过80%，可直接进行传代（方法同上）。

如何把细胞形态培养的更HAO更漂亮？

1、不同的细胞，喜欢的环境是不一样的。这个不仅仅是说培养基的不同，还有就是细胞生长的空间密度问题。有一些细胞是数量多一点比较HAO生长，生长状态也比较HAO。这种一般是属于生长速度慢的细胞。譬如内皮细胞。而有一些是细胞是数量少一点细胞状态会生长的比较HAO，譬如巨噬细胞和某些肿瘤细胞。尤其是巨噬细胞，生长速度非常得快，贴壁速度很快，所以传代时就应该留很少量的细胞，这样细胞状态会比较HAO。并且巨噬细胞比较喜欢扎堆生长，而堆与堆之间是有空间的。如果长成相连在一起的一满片的时候，细胞形态基本上就会差了，老化的会比较多，对后期实验结果是不HAO的。所以在养细胞的时候应该摸索该细胞喜欢的生长空间密度问题。

2、对于有些人总是会遇到养的细胞形态怎么都不HAO的问题。这个其实是有一个方法可以改善的。对于贴壁细胞，如果细胞形态不HAO，（或者细胞形态不清晰，表面似有异物等）可以在传代的时候进行如下操作：首先，倒掉旧的培养基，加入３ml新的培养基（有无血清的都可）洗涤一次，用滴管吸走，然后再加入３ml的培养基，进行预吹打，控制吹打力度，轻轻地大概沿着瓶底过一遍，然后吸走。这时侯再开始正式的消化、吹打。（巨噬细胞我们只吹打，不消化的）；其次，把吹打下来的细胞悬液加入到新的培养瓶内，培养瓶事先加入培养基，放入培养箱内培养，按时间点观察细胞贴壁情况。１０分钟观察一次，２０分钟，３０分钟观察一次。选择一个时间点，已经有部分细胞贴壁的情况下，重新置于洁净台，底面朝上迅速倒出其中的培养基，加入３ml新培养基再轻轻洗一次。然后加入完全培养基培养。后续观察细胞生长情况以及形态。我称之为“二传”。呵呵。如果一次效果还不理想，可重复多次。直到找到细胞完美形态。其中要注意，结合细胞喜欢的生长情况。喜欢多一点数量长得HAO的细胞你就等贴壁细胞比较多点的时候再传。反之亦然。

3、关于培养瓶内加入培养基的量的问题。这个是要靠自己去摸索你所养的细胞的。并不是小的玻璃方瓶１２ml，大方瓶１４ml的。有些细胞反而是培养基少一点相反细胞形态会长得比较HAO。（可能也是竞争很大，有YOU胜劣汰吧。呵呵。）对于生长速度快的细胞，易生长的细胞加少一点培养基细胞形态会更HAO。但是要注意换液掌握。

4、关于选择培养瓶的问题。个人发现生长速度快的细胞在玻璃瓶内生长的状态会比一次性相对HAO一些。而对于同一种细胞，在其生长旺盛快速的时期在玻璃瓶内的生长状态也比内HAO。这可能是因为比玻璃瓶更容易贴壁。生长速度快的细胞在这种相对“更安逸”的环境里反而长得状态不如玻璃瓶HAO。所以对于生长速度慢的细胞如果想要更漂亮的细胞状态，比玻璃瓶会HAO，对于生长速度慢的细胞，玻璃瓶则会更HAO。同样，对于同一种细胞，在其生长速度慢的时候，会HAO一点，比如刚刚复苏的时候，或者原代培养的时候。而在其生长旺盛的时候，玻璃瓶则相对会HAO一点。