CNE1人鼻咽癌细胞的培养操作流程与注意事项！

一、产品信息

平台编号：Bio-105851

规格：1×10Cells/T25培养瓶

细胞信息：CNE1

细胞名称：人鼻咽癌细胞

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、生长条件

培养基      90%高糖DMEM+10S

血清        10%  FBS (Diagnovum )

温度        37

空气条件    5% CO2，95% AIR

冻存条件    培养基50%、血清40%、DMSO 10%

三、组成

组成                 规格

细胞一瓶             T25

细胞培养与操作说明   1份

四、细胞接收后的操作流程

1、细胞收到后建议在培养箱稳定4小时左右再依据细胞密度，换液培养或传代。

2、如果细胞为贴壁细胞，而收到时呈悬浮或者部分悬浮的状态，请将悬浮的细胞及时离心，加15%血清的完全培养基到新的培养皿/瓶中继续培养3天；同时原培养瓶中剩下的贴壁细胞更换为15%血清的完全培养基，培养2-3天。若3天后细胞都没有出现增殖而是继续脱落死亡，请及时联系实验室，技术人员会跟进解决。

3、贴壁细胞生长缓慢：适当提高血清浓度（最高不超过20%），或可根据该细胞生长密度，考虑胰酶消化后，转移到新的培养瓶继续培养。

4、生长不均：贴壁细胞若出现生长不均，成岛状生长，可将细胞进行消化，重新打散细胞，加入新鲜培养基进行培养。

五、常规培养传代流程（请严格遵守无菌操作）

1、吸出原培养瓶中的培养基，PBS缓冲液润洗细胞两次，加1~2 ml 0.25% EDTA的胰酶消化（注意把握消化时间，通常控制在1~2min）。

2、镜下观察消化情况，在细胞边缘缩小，贴壁运动时（不建议消化到细胞漂浮）去掉胰酶，加6~8ml 完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落、吹散。

3、取出部分细胞悬液转移到新的培养皿/瓶中，添加适当的完全培养基，于培养箱中培养。

4、注意培养基PH值变化情况，定期换液，待细胞密度达到70-80%时重复传代操作或者冻存。

特别注意：（如使用公共实验室或初次接触细胞培养，建议添加双抗培养）

1、收到细胞后请尽快更换为含10% FBS的新鲜培养基，切勿使用原瓶中运输用培养基。

2、如签收时出现培养瓶壁破裂，漏液等情况请及时拍照并联系实验室。

3、细胞任何售后问题，均需拍照存档并及时联系客服。

六、注意事项

1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

2、收到细胞先不开瓶盖，瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置2-4小时（视细胞密度而定）稳定细胞状态。接着在倒置显微镜下观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收细胞时就整体外观拍一张照片，观察培养基的颜色和是否有漏液情况，随后在显微镜下拍下细胞状态，100*，200*各一张），观察记录细胞在运输过程中是否有污染情况。作为我方进行销售依据。

3、由于细胞状态受环境、操作和运输等多方面因素影响，故本公司只保证客户收到细胞后一周内的细胞状态，故客户需要售后时需出示收到细胞的时间证明及客户提供收货时间和发现问题后客服人员沟通的时间证明，期间间隔时间不能大于7天。

4、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。

5、客户在细胞培养过程中，有任何技术问题可以拨打技术售后服务电话，我们随时给予解答。