人主动脉平滑肌细胞的处理方法与培养步骤！

一、细胞简介

平台编号：Bio-106185a

规格：1×10Cells/T25培养瓶

细胞信息：HASMC

细胞名称：人主动脉平滑肌细胞

用途：研究

注意事项：仅用于科学研究或者工业应用等非医疗目的不可用于人类或动物的临床诊断或治疗，非药用，非食用（产品信息以出库为准）

二、细胞特性

细胞数量：1*10^6

组织来源：主动脉

细胞种属：人源

生长特性：贴壁

培养基：rh FGF-basic 0.5 mL 5 ng/mL rh Insulin 0.5 mL 5 µg/mL Ascorbic acid 0.5 mL 50 µg/mL L-glutamine 25.0 mL 10 mM rh EGF 0.5 mL 5 ng/mL Fetal Bovine Serum 25.0 mL 5%。

形态特征：形态变长，有时呈三角形

培养条件：胎牛血清至最终浓度为10％。环境：空气，95％;二氧化碳（CO2），5％；温度，37

细胞描述：一种在低血清条件下繁殖血管平滑肌细胞的完整解决方案。

细胞冻存：液氮冻存（冻存液基础培养基+20S+10%DMSO）

细胞运输：干冰运输（2ml冻存管）或活细胞运输（T25瓶）

三、细胞接收后的处理方法

冻存细胞接收后的处理：

1、干冰运输，收到细胞后立即转入-80冰箱短暂中转或直接复苏；

2、收到细胞后，若发现干冰已经完全挥发、冻存管瓶盖破裂脱落,请立即拍照后与我们联系。

复苏细胞接收后的处理：

1、收到细胞后，请首先检查培养瓶是否破损或漏液，培养液是否混浊，如有漏液及培养液混浊情况请立即拍照把图片发给我们。

2、75%酒精消毒瓶身后放培养箱中静置4-6h后，在显微镜下确认细胞状态并拍照100倍和200倍的照片，若有贴壁细胞脱落，可收集上清离心，将沉淀用新的培养基接种至新的培养瓶或培养皿中。

3、建议收到当天不要消化处理，如果细胞长满90%，可选择传代处理。

4、如您收到细胞3天内没有反馈相关问题，出现的细胞问题将不提供免费重发服务。

四、细胞培养方法

1、细胞传代：细胞密度达到80-90%时即可传代

弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次；

加入2ml0.25%胰酶（T25瓶），使胰酶覆盖整个瓶或皿，盖好放入培养箱消化；

1-2min后，显微镜下观察细胞，若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；若细胞还是贴壁，放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止；

将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清；

用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中，T25培养瓶加6-8ml培养基；

悬浮细胞直接离心收集，细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

2、细胞复苏：

将冻存管在37温水中快速摇晃融化，时间1min左右，加入4-5ml培养基混匀。

在1000RPM左右条件下离心4min，弃上清,加1-2ml培养基吹匀，将细胞悬液加入培养瓶中，补加适量培养基。

3、细胞冻存：待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

弃去培养上清，用PBS或生理盐水清洗1-2次，加入1mL 0.25%胰蛋白酶（T25瓶）

1-2min后，显微镜下观察细胞，大部分细胞回缩且有少量细胞脱落，轻轻吹打下确认消化情况后加入完全培养基终止消化；

将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min，弃上清，加1ml冻存液重悬细胞；

将冻存管放入程序降温盒，放入-80冰箱，4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

五、注意事项

1、收到细胞后，若发现干冰已挥发干净、冻存管瓶盖脱落、破损及细胞有污染，请立即与我们联系。

2、所有动物细胞均视为有潜在的生物危害性，必须在二级生物安全台内操作，并请注意防护，所有废液及接触过此细胞的器皿需要灭菌后方能丢弃。