醋酸杆菌分离纯化的操作方法与步骤！

醋酸杆菌是一类能使糖类和酒精氧化成醋酸等产物的短杆菌。细胞椭圆或短杆，0.8-1.2μm× 1.5-2.5μm，单生、成对偶尔成短链；细胞端尖或平。革兰氏阳性。运动，亚极生的单鞭毛或两根鞭毛。不产芽孢。极端严格好氧，化能无机营养，氧化氢、还原CO2生成乙酸。也可营化能有机营养，发酵果糖和其他底物几乎只产生乙酸。乙酸是代谢的有机终产物。不产生接触酶。最适生长温度30。广泛分布于水生环境中。模式种：伍氏醋酸杆菌(Acetobacterium woodii)。醋酸杆菌常存在于醋和醋的食品中。工业上可以利用醋酸杆菌酿醋、制做醋酸和葡萄糖酸等。

一、材料

样品：取发酵成熟的固体醋醅30g。

培养基：米曲汁碳酸钙乙醇培养基或葡萄糖碳酸钙培养基。

试剂：1%三氯化铁溶液，革兰氏染色液，0.1mol/LNaOH标准溶液，1%酚酞指示剂，无菌水等。

器皿：平皿，三角瓶，吸管，试管，玻璃珠等。

二、方法与步骤

1、富集培养

灭菌后，取500mL三角瓶装入30mL米曲汁液体培养基（其中含有0.0002%结晶紫和3%-5%的乙醇），加入1-2g样品经30振荡培养24h，若测定增殖液的pH明显下降、有醋味、镜检细胞革兰氏染色、形态与醋酸菌符合即可分离。

2、倾注法分离

取增殖液1mL于装有9mL无菌水三角瓶中（内含玻璃珠数粒），摇匀后，以10倍稀释法依次稀释至10-7，然后分别取10-7、10-6、10-5三个稀释度的稀释液各1mL置于无菌平皿中，每个稀释度平行两个平皿；

熔化米曲汁碳酸钙培养基，稍冷后加入3%的无水乙醇，摇匀，待冷至45-50，迅速倾入上述各皿，轻轻摇匀，待凝固后置于30，保温培养2-3d。观察小菌落的出现，醋酸菌因产生醋酸溶解了培养基中的碳酸钙，而使菌落周围产生透明圈，圈的大小因菌而异。

挑透明圈不同的菌落于米曲汁碳酸钙乙醇斜面培养基上，30培养24-48h。

3、性能测定

将上述各分离株分别接入米曲汁液体培养基中（300mL三角瓶装有20mL培养基），加无水乙醇至终浓度为5%，30振荡培养24h。

镜检：细胞呈整齐的椭圆或短杆状。

醋酸的定性分析：取发酵液5mL于洁净的试管中，用10%NaOH液中和，加l%三氯化铁溶液2-3滴，摇匀，加热至沸，如有红褐色沉淀产生而原发酵液已变得五色，即可证明是醋酸。

生酸量的测定：取发酵液1mL于250mL三角瓶中，加中性蒸馏水20mL、酚酞指示剂2滴，用0.1mol氢氧化钠溶液滴定至微红色，计算产酸量。

欢迎访问微生物菌种查询网，本站隶属于北京百欧博伟生物技术有限公司，单位现提供微生物菌种及其细胞等相关产品查询、咨询、订购、售后服务！与国内外多家研制单位，生物医药，第三方检测机构，科研院所有着良好稳定的长期合作关系！欢迎广大客户来询！