C666-1鼻咽癌细胞的培养步骤与应用！

一、背景

C666-1鼻咽癌细胞是EBV阳性鼻咽癌细胞系，是来源于阳性鼻咽癌的上皮细胞样贴壁细胞。培养条件为RPMI-1640+10S+1%双抗，生长条件为气相：5%CO2；95%空气温度：37。

二、培养步骤

1）复苏细胞：将含有1mL细胞悬液的冻存管在37水浴中迅速摇晃解冻，加入5mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入6cm皿中，加入约6ml培养基，培养过夜），第二天换液并检查细胞密度。

2）细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

弃去培养瓶中上清液，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

加1-2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加6ml完全培养基，轻轻吹打细胞层，尽量把细胞层吹落、吹散。

吹打匀后吸出，在1000RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

将细胞悬液按1：2到1：4的比例分到新的含6ml培养基的新皿中或者瓶中。

三、应用

用于C666-1和CNE2细胞的HMME-PDT杀伤效应实验研究：

概述了光动力学疗法（Photodynamic Therapy,PDT）在鼻咽癌治疗中的基础研究和临床应用现状。截至目前,在鼻咽癌的PDT研究中,绝大多数细胞或动物实验研究所选用的细胞是不能持续表达EB病毒的CNE2和HK1,但临床研究发现,95%的鼻咽癌患者的细胞中检测出EB病毒。

目前,C666-1细胞是唯一能持续表达EB病毒的鼻咽癌细胞。为此,实验比较研究了HMME-PDT对两种不同类型鼻咽癌细胞C666-1和CNE2的杀伤效应,并对结果进行了深入分析和讨论,为临床鼻咽癌光动力学治疗提供理论基础。

实验结果表明,C666-1和CNE2细胞中HMME的潴留浓度随着孵育时间增加而增大,但CNE2细胞对HMME的吸收明显高于C666-1;随着孵育时间的增加,两种鼻咽癌细胞对HMME的吸收均趋于饱和。HMME主要分布在C666-1和CNE2细胞的细胞核外周,两者没有显著的差异。

在外界药物孵育浓度相同的情况下,C666-1和CNE2细胞存活率均随光剂量的增加而减小,HMME-PDT对C666-1和CNE2细胞杀伤效果存在显著差异,CNE2的细胞存活率小于C666-1。当细胞内潴留的药物量基本相同时,两种细胞的存活率没有明显差异。细胞内光敏剂的潴留浓度和光剂量是决定PDT疗效的关键要素。