HS68人男性正常龟头细胞的处理方法与应用！

一、背景

HS68人男性正常龟头细胞是由Owens·R·B于1969年建株，细胞分离自正常男性的海绵体包皮组织属于成纤维细胞样贴壁细胞。生长培养基未MEM＋10S＋1%P/S，培养条件为气相：空气，95%；CO2，5%；温度：37。

二、贴壁细胞处理方法

1、收到细胞，用75%的酒精消毒（建议配制75%酒精的水是灭菌过的）培养瓶外部。

2、肉眼观察细胞培养基颜色，显微镜观察细胞生长情况，并对细胞进行不同倍数拍照（建议收到时的培养瓶拍一张照片，显微镜拍收到时的细胞100X,200X各一张）。

3、显微镜观察细胞，当细胞融汇至80%左右（可以传代的情况下），细胞应该在37度培养箱预温1-2h后再做处理。如未达到细胞传代密度，培养瓶应预留一部分培养基继续培养。

4、严格无菌操作，打开细胞培养瓶。将细胞培养瓶内的培养基用吸管完全吸出（严禁直接倾倒），放入另一无菌容器中（建议换新的培养基培养细胞）。

5、用PBS 2-3ml/次轻轻洗细胞表面，加入适量的0.05%胰酶-EDTA消化细胞,显微镜下观察细胞变圆，轻轻拍打培养瓶直到细胞脱落，加入终止液终止。

6、1000rpm,5min离心，重悬细胞。换新的细胞培养瓶，37,5%CO2培养。

三、应用

用于基于细胞层面表征的室内用白光LED光生物安全研究：

对室内用白光LED光生物安全性痕量检测方法进行研究:结合本课题前期的成果,以荧光粉激发白光LED作为实验光源,以四种人体皮肤和眼睛细胞作为实验细胞,运用MTT比色法对不同辐照时长和不同辐照强度下的光生物安全性评价指标——细胞活力分别进行测定实验。

对室内用白光LED致人体细胞损伤机制进行研究：

以色温为4000K荧光粉激发白光LED作为实验光源,以四种人体皮肤和眼睛细胞作为实验细胞,以皮肤细胞1h、眼睛细胞2h作为实验辐照时长,以60W/m2作为实验辐照强度,对光照处理后细胞内氧化自由基（ROS）水平、细胞内丙二醛（MDA）含量、细胞外乳酸脱氢酶（LDH）含量、细胞凋亡程度、调控细胞凋亡的相关基因和信号转导通路表达分别进行测定实验。

通过对上述两个阶段研究的实验数据进行科学地处理和分析,得出以下结果和结论:建立了一种可以直接、快速地反映室内用白光LED光生物安全性的痕量检测方法,用于检测室内用白光LED的早期、潜在危害性。

得出了室内用白光LED致人体细胞损伤机制—细胞在受到实验光照处理后,细胞内ROS水平升高,其代谢平衡被打破,通过脂质过氧化作用造成细胞膜损伤,通过上调凋亡抑制基因Bcl-2的表达水平和下调凋亡促进基因Bax的表达水平诱导细胞凋亡,MAPK信号转导通路（主要为JNK和p38途径）亦参与其中,人永生化角质细胞HaCat激活的途径主要为p38;人晶状体上皮细胞SRA01/04和人视网膜色素上皮细胞D407激活的途径主要为JNK,而男性正常龟头细胞系HS68中,ERK1/2、JNK和p38三者的活化程度均不显著。