缓冲动力-硝酸盐培养基的应用与使用方法！

一、背景

缓冲动力-硝酸盐培养基用于鉴别细菌动力和硝酸盐还原试验，配方(每升)：蛋白胨5g；牛肉膏粉3g；硝酸钾1g；琼脂3g；最终pH7.0±0.2。

原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供氮源、维生素、矿物质;硝酸钾被某些细菌还原为亚硝酸盐;较少量的琼脂作为培养基的凝固剂。

二、使用方法

1、称取本培养基12g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装试管，121高压灭菌15min，垂直放置，待冷却后备用。

2、取微生物检测菌进行垂直穿刺接种后，于36±1培养24h。

3、观察接种线的生长情况，判断有无动力。然后，滴加甲萘胺液(硝酸盐甲液)，和对氨基苯磺酸液(乙液)各0.5mL，观察颜色反应，硝酸盐还原阳性者为红色，阴性者不变色。

硝酸盐还原试验是根据某些细菌能还原硝酸盐为亚硝酸盐，亚硝酸盐与醋酸作用，生成亚硝酸，亚硝酸与试剂中的对氨基苯磺酸作用生成重氮基苯磺酸，后者与α-萘胺结合生成N-α萘胺偶苯磺酸这个原理进行的试验方法。

硝酸盐还原试验广泛用于细菌鉴定。肠杆菌科细菌均能还原硝酸盐为亚硝酸盐;假单胞菌属中有的细菌能产生氮气，如铜绿假单胞菌、嗜麦芽窄食单胞菌、斯氏假单胞菌，有的则能还原硝酸盐为亚硝酸盐，如鼻疽假单胞菌等;厌氧菌如韦荣菌也能还原硝酸盐为亚硝酸盐。异常结果：肠杆菌科细菌引起肠道外感染以泌尿道感染为多见,机会性致病可引起化脓性炎症,如胆囊炎、腹膜炎、肺炎、脑膜炎和败血症等。

三、应用

用于SO2脱硫菌群落结构及其特性研究：

应用分离培养技术与16S rRNA基因测序分离鉴定技术相结合的方法对驯化所得的脱硫菌群进行种属鉴定,发现诱导驯化7d的菌群中分离的23株菌分别归属于10个种,微生物多样性丰富,代表Rhodococcus erythropolis（红平红球菌）的菌种是菌群中的顶级优势菌种,占分离菌株的43%；诱导驯化14d脱硫菌群中分离出的22株菌分别归属于8个种,丰富度有所降低,Pseudomonas putida（恶臭假单包菌）是菌群的顶级优势菌种。

连续驯化过程中种群结构和数量发生变化表明整个驯化过程既有原始种群的消亡也有新种群的出现。从驯化所得的脱硫菌群中分离得到Rhodococcus erythropolis（红平红球菌）Microbacterium oxydans（氧化微杆菌）、Pseudomonas putida（恶臭假单包菌）、Sphingomonas koreensis（鞘氨醇单胞菌）、Acinetobacter junii（琼氏不动杆菌）、Enterobacter ludwigii（路德维希肠杆菌）、Brevundimonas aurantiaca（橙色短波单胞菌）、Staphylococcus saprophyticus（腐生性葡萄球菌）、Micrococcus luteus（藤黄微球菌）、Enterococcus faecium（肠球菌）、Microbacterium esteraromaticum（微酯香菌）、Acinetobacter johnsonii（约氏不动杆菌）和Kocuria rosea（玫瑰色库克菌）等13种菌,首次证明这些菌可以用于S02降解,其中的Rhodococcus erythropolis、Microbacterium oxydans、Sphingomonas koreensis、Pseudomonas putida、Acinetobacter junii、Acinetobacter johnsonii等6种菌是菌群中起主要降解S02作用的功能菌。

该6种功能菌的生长周期短,适应能力强,生长速率快,而且在持续驯化过程中能稳定传代,使脱硫菌群保持稳定的脱硫性能。这些功能菌降解S032-的代谢产物主要是硫酸根,其中Rhodococcus erythropolis、Acinetobacter junii和Acinetobacter johnsonii 3种菌的代谢产物中还含有少量单质硫。