卵黄氯化钠琼脂培养基的应用与使用方法！

一、背景

卵黄氯化钠琼脂培养基用于厌氧梭状芽孢杆菌的分离培养和卵磷脂酶试验，每65ml培养基中添加10ml的10%氯化钠卵黄液。

培养基的配方：胰蛋白胨10.0g甘露醇5g牛胆盐20g磷酸氢二钠6.5g磷酸二氢钾2g煌绿0.0135gPH 7.0-7.4。

检测原理：蛋白胨和牛肉膏粉提供碳氮源、维生素和生长因子；葡萄糖提供能源；氯化钠维持均衡的渗透压；琼脂是培养基的凝固剂；产气荚膜梭菌具有卵磷脂酶分解卵磷脂生成不溶性甘油酯形成乳白色的混浊带。

二、使用方法

1、称取本品50g，加入蒸馏水或去离子水1 L，搅拌加热煮沸至完全溶解，分装三角瓶，121灭菌15min，冷至50左右，每100mL培养基加入50%的无菌卵黄盐水悬液10—15mL，摇匀立即倾注平皿，凝固后备用。卵黄乳液：用硬刷刷洗鲜蛋，沥干，放70%乙醇中浸泡1h。以无菌操作取出蛋黄，加等体积无菌0.85%氯化钠溶液，混合置4贮存。

2、取待检菌的新鲜培养物划线接种或点种于卵黄琼脂平板上，于36±1厌氧培养24h。

3、观察接种点的变化。产气荚膜梭菌产生卵磷脂酶，分解卵黄中的卵磷脂，接种点的底部及周围形成乳白色的混浊带。

三、应用

用于家兔肠道细菌的筛选、鉴定及部分菌种生长特性的研究：

选用不同培养基，对兔肠道微生物进行分离培养，筛选优势菌株，并研究其生长特性。

方法：选用MRS、MRS+10％家兔软粪浸出液、MRS+10％家兔硬粪浸出液和MRS+10％泡菜汁四种培养基，对断奶仔兔和生长兔回肠、盲肠的微生物分别进行需氧和厌氧培养。根据可培养细菌菌落特征、染色特性和显微镜形态观测对不同菌株进行划线分离，并对纯化菌株进行生化试验，鉴定其种属。对经鉴定可用作益生菌的菌种进行安全性试验。

结果表明：

MRS+10％家兔软粪浸出液培养基可培养的微生物种类明显高于其他培养基，是分离筛选家兔肠道微生物的适宜培养基。

根据菌落形态，革兰氏染色特性及显微镜形态观测，共分离出37株菌株，其中需氧菌22株，厌氧菌15株。结合生化试验综合鉴定，在需氧菌株中，分离出大肠杆菌属2株，粪球菌属2株，肠球菌属1株，显核菌属1株，短乳杆菌属2株，布氏乳杆菌属1株，蜡状芽孢杆菌1株，唾液乳杆菌1株，柠檬酸细菌属2株，其余9株未鉴定。厌氧菌株中，梭杆菌属3株，双歧杆菌属2株，韦荣氏球菌属1株，乳杆菌属2株，明串球菌属2株，9为乳球菌属，拟杆菌属2株，其余2株未鉴定。

筛选的13株优势菌株中需氧菌7株，分别为粪球菌属2株，肠球菌属1株，乳杆菌属2株，2株未鉴定种属；厌氧菌6株，分别为梭杆菌属1株，双歧杆菌属1株，乳杆菌属1株，乳球菌属1株，明串球菌属1株，拟杆菌属1株。

断奶仔兔盲肠中需氧菌株数极显著高于回肠（P＜0.01），厌氧菌株数稍高于回肠，但差异不显著；青年兔盲肠中需氧菌和厌氧菌株数均显著高于回肠（P＜0.05）。

从优势菌株中初步选出6株细菌，分别为粪球菌属2株、乳杆菌属1株、乳球菌属1株、双歧杆菌属1株、明串球菌属1株，安全性试验结果表明，上述株菌发酵液对实验小鼠健康状况无不良影响。