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色谱柱信息 

成都摩尔提供的 Proteomix 离子交换色谱柱特别针对蛋白质、寡核苷酸 和多肽的分离而设计，该柱具有高分辨率、高柱效、高回收 率的特点。填料基质为刚性、球形、高交联度的聚苯乙烯- 二乙烯苯(PS/DVB)颗粒。离子交换柱分多孔与无孔 PS/DVB 两种。多孔 PS/DVB 树脂颗粒大小有 5μm、10μm，孔径为 500 Å。无孔的树脂颗粒大小有 1.7μm、3μm、5μm、10μm。 PS/DVB 树脂表面键合有一层高度亲水的纳米级厚度的中 性聚合物薄层。疏水的 PS/DVB 树脂表面完全被这种亲水材 料覆盖，从而消除了 PS/DVB 对生物分子的不可逆吸附，保 证了其具有很高的分离效率和生物样品回收率。运用赛分独 有的化学键合技术，可将离子交换功能基团致密均匀地键合 在亲水层的表面。

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图 1. Proteomix SCX、WCX、SAX、WAX 键合的化学组成 如图 1 所示，Proteomix 离子交换柱有强阳离子交换 (SCX)、弱阳离子交换(WCX)、强阴离子交换(SAX)、弱阴 离子交换(WAX)四种。Proteomix SCX、WCX、SAX、WAX 相分别是将磺酸基、羧基、季胺基和叔胺基化学键合在有孔 或无孔 PS/DVB 树脂亲水涂层表面而制备得到。

稳定性和性能 

由于 PS/DVB 的表面修饰是完全基于化学键键合，所以 Proteomix 离子交换色谱柱具有优异的稳定性。该固定相能够与 大多数缓冲液如醋酸铵、磷酸盐、Tris 等相容。在 pH 6.0 时以 20 mM 磷酸盐缓冲溶液为流动相运行 Proteomix SCX 和 WCX 色谱柱，或在 pH 8.0 时以 20 mM Tris 缓冲盐为流 动相运行 Proteomix SAX 和 WAX 色谱柱 1000 次或使用 3 个月，柱效几乎没有变化。

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Proteomix SCX-NP、WCX-NP、SAX-NP、 WAX-NP 树脂以无孔 PS/DVB 颗粒为基质，表面覆盖有亲水层并键合 了一层均匀的离子交换功能基团。这些固定相具有三个特 点。首先，纳米级厚度的亲水层完全消除了载体与生物样品 之间的非特异性相互作用。其次，无孔颗粒结构使样品的横 向扩散达到最小，同时抑制了其向填料颗粒内部的扩散。第 三，赛分的特有技术可以合成均匀致密的离子交换层。独特 设计的 Proteomix SCX-NP、WCX-NP、SAX-NP 和 WAX-NP 固定相可为蛋白质、寡核苷酸、糖类和多肽等提供最好的分 辨率和分离效率。图 2 是 Proteomix SCX-NP 柱(4.650 mm， 3 µm)对三种蛋白（核糖核酸酶 A、细胞色素 C、溶菌酶） 的分离结果。溶菌酶在 5cm 长的柱子上分离效率达到了 100,000 理论塔板，这样的分离效果前所未有。 图 3 是用 Proteomix SAX-NP5 色谱柱分离卵清蛋白和 BSA 混合物得到的一张色谱图。Proteomix SAX-NP5 极高的分辨 率和选择性不仅使 BSA 二聚体与 BSA 分开，而且卵清蛋白 混合物中的杂质也得到了分离。 

/upload/image/20170306075322_52503.jpg离子交换色谱柱使用说明" />

Proteomix SCX-POR、 WCX-POR、 SAX-POR 和 WAX-POR 填料以多孔 PS/DVB 颗粒为基质，表面覆盖有亲 水层并键合了一层均匀的离子交换功能基团。孔径为 500 Å。该固定相具有三个特点。首先，纳米级厚的亲水层完全 消除了载体与生物样品之间的非特异性相互作用。其次，赛 分的特有技术可以合成均匀致密的离子交换层。第三，多孔 颗粒具有较大的比表面积，从而具有很高的分离容量。 Proteomix SCX-POR 、 WCX-POR 、 SAX-POR 和 WAX-POR 对蛋白质、寡核苷酸、多肽等的分离具有极高的 分离度和分离容量。该多孔填料特别适用于生物分子的半制 备和制备分离与纯化。 Proteomix SCX、WCX、SAX 和 WAX 色谱柱的内径 有 0.75、2.1、3.0、 4.6、7.8、10 和 21.2 mm，长度有 2、3、 5、10、15、25 和 30 cm。 成都摩尔科学仪器有限公司也可以根据客户的要求 定制色谱柱。 

安全注意事项 Proteomix 离子交换色谱柱通常在高压下运行。如果管路连 接不紧，将会导致有机溶剂和注入样品的泄漏，从而对操作 人员的健康产生影响。一旦发生泄漏，应佩戴适当的手套进 行处理。另外当打开色谱柱时还应采取适当的保护措施，以 防止微小的高分子颗粒进入呼吸道。 色谱柱安装与操作 色谱柱在运输过程中或在没有使用时，它的两端总是 用堵头进行密封。当将色谱柱接入色谱仪器系统时，首先移 去两端的堵头。请注意将流动相流动的方向与柱上标记的方 向保持一致。除非出于特殊考虑，例如为了清除堵在色谱柱 入口端的脏污等而需要将色谱柱反接以进行冲洗时，建议用 户在接上色谱柱时一定要遵循柱上标记的方向。由于色谱柱 的连接是整个色谱操作过程的一部分，如果密封卡套过紧， 或安装不合适，或者密封卡套与色谱柱端口不匹配，都有可 能导致溶液的泄漏。请按照下面步骤将色谱柱与密封卡套相 连接，从而将色谱柱接入 HPLC 系统： （a）第一次使用的管线，请依次将管线接头和密封卡套装 在外径 1/16”的管线上。密封卡套的宽口端应朝向管线接头。 （b）将管线紧紧插入色谱柱的接口，向前滑动密封卡套和 管线接头，并使管线接头的螺纹与色谱柱端口的螺纹相互衔 接，然后拧紧管线接头。如果管线为高分子材料，请转到步 骤（d）；如果是金属管线，请继续（c）。 （c）在用力将管线压入柱端接口之后，用 1/4”扳手将已拧 紧的螺帽再进一步紧固。（d）对色谱柱的另一端采用上述方法进行操作。 

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样品与流动相 

为了避免色谱柱的堵塞，所有样品和溶剂，包括缓冲溶 液在内，都必须在使用前用 0.45m 或 0.2m 的滤膜过滤。 建议使用预柱滤片（0.5m 孔径）或保护柱来保护色谱柱。 Proteomix 离子交换柱可以使用水溶液，或者有机溶剂（如 甲醇、乙腈）与水的混合物等来作为流动相。典型的流动相 中含有磷酸、醋酸或 Tris 的钠盐或钾盐。流动相在使用前需 要脱气。一个简单的脱气方法是将流动相在由水泵形成的真 空下超声 5min。 Proteomix SAX 和 WAX 柱和非离子及两性离子洗涤 剂相容，但是与阴离子洗涤剂不相容。Proteomix SCX 和 WCX 柱和非离子及两性离子洗涤剂相容，但是与阳离子洗 涤剂不相容。

 色谱柱的保养 运输溶剂 新的 Proteomix SAX 和 WAX 柱中的液相是 20 mM Tris 缓冲液（pH 8.0）。新的 Proteomix SCX 和 WCX 柱 中的液相是 20mM 磷酸盐缓冲液（pH 6.0）。

  第一次使用 在储存和运输过程中，填料可能会干涸。这时 推荐用 10-20 倍柱体积的运输溶剂进行冲洗以活化色谱柱。 接着可用用户自己选择的流动相冲洗色谱柱。流速由 0.1mL/min 逐渐升至所需的操作条件，直至基线稳定为止。 如果柱压和基线波动较大，这可能是气泡进入了色谱柱中。 这时可用较高流速冲洗色谱柱 2-5 分钟，例如 4.6250mm 的色谱柱可采用流速 1.0mL/min。如果流动相的类型或 pH 与色谱柱中的储存溶剂差异较大，建议将色谱柱先用新的流 动相冲洗 10 倍柱体积。 

pH 为了获得最佳的分离效果和延长柱的使用寿命，请尽 量使用 pH 在 2-12 范围内的流动相。

压力 尽管粒径为1.7μm、3μm、5μm、10μm的无孔Proteomix 离子交换柱可分别在高至 10,000psi、8,000psi、5,000psi、 5,000psi的压力下使用，但正常的操作压力应当低于3,500psi （1.7μm 应低于 5,000 psi）。长时间在高压下运行可能损坏 色谱柱和输液泵。由于压力来源于流速，因此最大流速将受 制于系统所能承受的压力。一般而言，柱压会随着色谱柱使 用时间的增加而逐渐增加。压力突然增加预示色谱柱入口端 的筛板发生了堵塞。在这种情况下，建议将色谱柱反接后用 适宜的溶剂进行冲洗。

 温度 最高操作温度为 80C。为了延长柱的使用寿命，请尽 量在 10-50C 范围内操作。长时间在高温（>80C）下操作 也会损坏色谱柱，这种情形在高的 pH（>12 或<2.0）条件 下特别突出。 

流速范围 内径为 4.6mm 的色谱柱，其正常操作流速为 0.1-1.0mL/min。

 储藏 长期不用时，请将 Proteomix SAX 和 WAX 柱保存在 含 0.1%NaN3 的 20 mM Tris 缓冲液（pH 8.0）中。Proteomix SCX 和 WCX 柱保存在含 0.1%NaN3 的 20mM 磷酸盐缓冲 液（pH 6.0）中。色谱柱需要用储存缓冲溶液冲洗至少 15 倍柱体积。然后再用随色谱柱附上的两个可拆卸的堵头塞紧 色谱柱的两端以防止柱床的干涸。 

色谱柱的清洗 （1）如果预柱滤片或保护柱在分离之前曾 经使用过，需要首先将预柱滤片或保护柱反接用清洗溶液冲 洗 15-30min。如果经过冲洗效果没有得到明显改善，则需 要更换预柱滤片或保护柱。对于 Proteomix 阴离子交换色谱 柱，清洗溶液为含 150mM 硝酸钾的 75%乙腈溶液（用 HCl 调节 pH 至 2）。对于 Proteomix 阳离子交换色谱柱，清洗溶 液为含 1.0M NaCl 的 50mM 磷酸盐缓冲液（pH10）。 （2）在使用过程中，样品经常会被吸附在柱入口端的筛板 或者填料上。当样品吸附累积到一定程度时，柱压将会升高， 色谱峰形也会出现展宽。这时就需要清洗色谱柱了。下面是 色谱柱清洗的基本步骤。 1．将色谱柱与检测器断开； 2．将色谱柱反接后进行冲洗； 3．将流速设置到所推荐的最大流速的 50%进行冲洗。注意 柱压的变化。如果柱压超出正常水平许多，则需要降低流速， 或选用低粘度的清洗溶液； 4．通常 10-15 倍柱体积的清洗溶液就足够了。下面将介绍 可供选择的清洗溶液。低 pH 的盐溶液有助于去除碱性蛋白。 高 pH 的盐溶液有助于去除酸性蛋白。有机溶剂可去除疏水 蛋白。这里推荐两种常用的清洗溶液：对于 Proteomix 阴离 子交换色谱柱，清洗溶液为含 150mM 硝酸钾的 75%乙腈溶 液（用 HCl 调节 pH 至 2）；对于 Proteomix 阳离子交换色谱 柱，清洗溶液为含 1.0M NaCl 的 50mM 磷酸盐缓冲液 （pH10）。

色谱柱的保护 除了需要过滤样品和流动相外，保护色谱柱的最佳方 法是在色谱柱前连接保护柱或预柱滤片。预柱滤片可以去除 样品或流动相中的残留颗粒，或者从 HPLC 系统，如泵或进 样器垫圈上脱离下来的颗粒。更为有效的方法是使用保护 柱，因为它可以除去样品、流动相或者来自于 HPLC 系统中 的具有强吸附能力的样品组分和残留颗粒。